染色昆虫行为检测：麻醉的交配行为<em>果蝇</em

1.准备飞食品与食品着色取标准果蝇小瓶大约20毫升食物中的底部（ 图1）。使用下面的方法，使用1升沸水混合食物为10g琼脂，85克葡萄糖，60克玉米粉，40克酵母中，并搅拌5分钟憋着的。加25毫升10％的nipagen一旦混合物已经冷却至75℃。 后的食品已冷却和固化加两滴-蓝色食用色素（约0.5 1毫升）中的食物的顶部，并散布在所述小瓶的整个表面（ 图1）。使用不同的颜色的染料，如果首选。 离开食品两天在冰箱使染料是由食物的顶层吸收;这样就避免了过多的水分在成熟期损坏苍蝇。添加一小片卫生纸，如果过多的水分仍是一个问题，吸干多余的水分，随后将其删除。 转印蝇到食品单独或组。 注意：蝇将获得1天之内被放置在食物肠染色。另外，完全成熟的苍蝇在食物染色实验（在成熟期间没有接触到食用色素观察死亡率增加）之前。 检查染色的苍蝇可从非染色苍蝇容易辨别。使用一个更高浓度的染料，或者不同的染料1.4 – 如果他们不能区分，重复步骤1.1。 2.两个男交配试验用食用色素为了生产后代，建立了包含对男性和女性的苍蝇多瓶（小团体的男性和女性都同样适用，但要小心避免幼虫拥挤）。让女性产卵和移动苍蝇新瓶每5 – 7天。在合适的温度为感兴趣的物种商店小瓶（22°C 2 F或D. pseudoobscura和D. subobscura和25℃D.果蝇 ）。 之前收集实验苍蝇除去所有的苍蝇从收集小瓶在设定的时间收集男性和女性之前，以确保它们将是处女（ 果蝇 – 6小时，在25°C，D pseudoobscura – 18小时在22℃，并D. subobscura – 24小时，在22°C）。 注意：如果过得不处女这将偏向自己的交配试验15的行为。 存储和单独的标准的75×20毫米的塑料瓶成熟男性（含约20毫升食物）。这样就避免了对男性的交配行为和健身看到一些物种的负面影响时，男性被保存在组16。 露出一半的男性到所需的治疗（CO 2麻醉在这种情况下）。使用CO 2垫或点击揭露苍蝇所需的时间。在发作店一半ES在每次治疗的各色美食，直到交配发生。这会让他们在交配试验在视觉上​​区分。 对于转移苍蝇使用抽吸17。标记每个小瓶，以确定两者的治疗和阳的颜色状态。这里，可使用四个处理（麻醉，非有色= G-NC，麻醉，有色=气相色谱，无麻醉，无着色，NG-NC和没有麻醉的，有色的，NG-C）。 转让新出现的女性到新鲜食品小瓶成熟为10组。 允许苍蝇成熟于配合年龄（ 果蝇 – 3天，D。pseudoobscura – 5天，D。subobscura – 7天18商店拥有在合适的温度为物种正在研究（ 例如，22℃，程序 D。 。pseudoobscura和D subobscura和25℃ 果蝇 ）。 移动雌性个体小瓶（续癌宁约20毫升食物）1天交配试验驯化到配合小瓶之前。标注这些小瓶使小瓶可以分化。小心使用中性标签盲目的实验（ 即 1 – 150），所以它是不可能的猜测苍蝇的身份在任何小瓶。 注意：人谁放置苍蝇到每个小瓶必须知道苍蝇放入每个小瓶，因为它们会注意到其治疗染色的身份。然而，谁手表交配观察者不应该知道自己的身份。要做到这一点的至少两个实验者将需要，一个用于建立和一个观察。 开始交配试验间10 – 上午12点，或在一个时间，与在光/暗循环的苍蝇暴露（“黎明”为蝇）的光来上重合。添加两个雄蝇每个交配瓶（含单身女飞）采用吸气。确保这两个男子是从不同的治疗（麻醉或控制）和一个具有肠染色以使其能够彼此区分它们，并注意其男性被染色。 如果发生交配，记录下队友男性的地位（无论是颜色还是非 – 彩色）。如果试验持续2小时，假设女性不会交配。 注：2小时是适合这些物种，但其他的果蝇 ，可能需要更多或更少的时间。 3.单雄性交配试验对于单身男性的试验，重复协议2有两个变化： 在步骤2.3并没有以有色食物的男性。 在步骤2.7，只添加一个单身男性每小瓶。 在步骤2.8中，记录飞被添加到小瓶中，配合启动和时间的配合完成后应记录时间的时间。从这些值，计算交配成功率，延迟和持续时间。 4.数据分析使用适当的统计数据包ANA裂解。如果数据是正常的，只有两种处理中，使用t检验或等效广义线性模型（GLM）。两个男的实验中，使用二项测试或二项式GLM可用在任何基本的统计数据包。 注意：对于示例数据，所有的分析进行了在研发版本3.0.3 19。 检查交配延迟和交配持续时间数据为正常，通过绘制每处理20的延迟和持续时间的频率直方图，并使用一个测试为常态如夏皮罗-威尔克。如果它是不正常的，改造它，或者使用非参数统计数据相当于20。 注意：对于从单雄性实验的示例性数据记录变换会见正常和方差相等的要求。 如果数据可以是归一化，使用t检验来使用两种处理21时检查在单雄性交配试验交配延迟和持续时间之间的差异。如果多次治疗时，尝试使用方差分析（ANOVA）20。如果该数据不能被标准化，尝试等效非参数检验21。 使用二项式测试来测试的任食品着色或CO 2麻醉上竞争的男性20的交配成功的效果。如果多次治疗中使用，为的是与实施例的数据的情况下，使用具有二项式误差结构21一 ​​个GLM。 对于本例中的数据的两名男性试验中，使用GLMS与二项式误差结构。一个GLM检查颜色作为响应变量（有色= 0和非着色= 1）与物种，气体状态和气体处理装作为解释variables.One GLM审查的CO 2作为响应变量（脱气= 0和不脱气= 1）种，色状态和气体处理装。在每一种情况下，产生的最大的模式，并执行基于AIC 20模型简化。