마우스에서 냄새 차별과 요법 이니에 대한 테스트
Summary
This manuscript describes a protocol to examine the olfactory system of rodents. The olfactory habituation/dishabituation test will allow investigators to determine whether a mouse habituates to a repeatedly presented odor and whether the mouse demonstrates dishabituation when presented a novel odor.
Abstract
This video demonstrates a technique to establish the presence of a normally functioning olfactory system in a mouse. The test helps determine whether the mouse can discriminate between non-social odors and social odors, whether the mouse habituates to a repeatedly presented odor, and whether the mouse demonstrates dishabituation when presented with a novel odor. Since many social behavior tests measure the experimental animal’s response to a familiar or novel mouse, false positives can be avoided by establishing that the animals can detect and discriminate between social odors. There are similar considerations in learning tests such as fear conditioning that use odor to create a novel environment or olfactory cues as an associative stimulus. Deficits in the olfactory system would impair the ability to distinguish between contexts and to form an association with an olfactory cue during fear conditioning.
In the odor habitation/dishabituation test, the mouse is repeatedly presented with several odors. Each odor is presented three times for two minutes. The investigator records the sniffing time directed towards the odor as the measurement of olfactory responsiveness. A typical mouse shows a decrease in response to the odor over repeated presentations (habituation). The experimenter then presents a novel odor that elicits increased sniffing towards the new odor (dishabituation). After repeated presentation of the novel odor the animal again shows habituation. This protocol involves the presentation of water, two or more non-social odors, and two social odors. In addition to reducing experimental confounds, this test can provide information on the function of the olfactory systems of new knockout, knock-in, and conditional knockout mouse lines.
Introduction
마우스는 다른 개인을 인식하는, 음식을 찾는 새로운 환경을 탐색하기위한 후각에 의존하고, 성적 행동 1-3. 그것은 연구자가 실험 동물 음식, 사회적 상호 작용, 또는 마우스의 응답을 유도하기위한 어떤 냄새를 포함하는 행동 테스트를 투여하기 전에 냄새가 작동하는 감각을 가지고 있는지 여부를 설정하는 것이 중요하다. 후각 상실증 또는 무능력 행동 패러다임 다양한 가양 음화 초래할 수있는 다른 냄새 구별하기 때문에 행동 검사의 다른 유형이 수행되기 전에 검출하고 악취를 구별하는 마우스의 능력은 확립되어야한다.
후각 습관화 / dishabituation 시험 제 1980 4에 기재 하였다. 시험은 박사에 의해 마우스에서 사용되도록되어왔다. 뮤 양 및 재클린 크롤리 5. 이 조사는 ESTA 할 수있는 간단하고 저렴한 검사입니다마우스를 감지하고 냄새를 구별 할 수 blish. 후각 테스트뿐만 아니라,이 테스트는 조사자 마우스의 일반적인 동작을 관찰하고 초기 테스트 요법으로 수행 할 수있게한다. 질적 마우스의 운동에 대한 관찰, 불안의 징후, 활동 수준, 음식 냄새 대 사회 냄새에 반응 테스트를 수행 할 수있는 새로운 영역을 신호 수 있습니다.
이 시험에서, 다양한 냄새에 침지 면봉 행 마우스에 세 번 제공된다. 냄새의 각 반복 프레 젠 테이션으로, 마우스는 각 후속 프리젠 테이션을 조사 적은 시간을 보내고, 면봉에 길들 것이다. 새로운 냄새가 제공되면 dishabituation가 발생하고, 전형적인 마우스는 현재 및 이전 (5) 냄새를 구별 할 수 있음을 나타내는, 면봉을 조사 시간을 보낼 것이다. 이 시험은 한번에 하나의 마우스에 투여하고 45 분 ACC를 포함limation 기간은 시험을 45 분으로 하였다.
이 테스트를 수행하기 쉽지만 그것은 마우스 후각 시스템에 대한 정교한 질문을 조사하는데 사용될 수있다. 이러한 매립 식품 시험 후각 등의 다른 대중적인 테스트는 단순히 후각 상실증의 유무를 확립한다. 그러나 후각 차별과 습관화 검사는 수사관이 마우스는 냄새를 감지 할 수 있지만, 다른 냄새를 구별 할 수있는 능력을 가지고뿐만 아니라 것을 확인할 수 있습니다. 습관화 및 dishabituation의 패턴은 새로운 돌연변이 -6,7- 냄새를 구별 할 수 있음을 확립하는데 사용되어왔다. 놀라운 연구에서, Fadool 연구진은 정상 마우스 (8)보다 매우 유사한 냄새를 구별 할 수 있습니다 "슈퍼 smellers을"Kv1.3 채널의 유전자 타겟 삭제와 그 쥐를하고 있습니다 보여 냄새의 복잡한 혼합물을 사용했다.
새로운 녹아웃 마우스 모델을 검토 할 때 그것은 establis하는 데 유용합니다시간 기본 감각 작업에 대한 정상적인 동작의 존재. 테스트식이 요법 초기에 완료되면, 냄새 차별과 습관화 검사는 수사관에게 이상한 행동을 관찰 할 수있는 기회를 제공합니다. 이러한 관찰은 돌연변이의 특성을 교란하기 때문입니다 이후 테스트에서 거짓 긍정적이거나 부정적인 결과를 방지 할 수있다. 연구자들은 사회적 행동을 기본 후각 기능을 검증 할 필요성을 조사하기 위해 지속적으로 점점 더 중요 해지고있다. 돌연변이 라인 후각 검사 이외에도,이 시험은 모든 냄새 자극에 대한 약리학 적 치료가 특히 사회적 냄새 자극에 대한 동물의 반응을 증가 여부 등 또는 그들의 응답이 향상되는지 구체적인 질문을 해결하기 위해 사용될 수있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
이 문서에서 제공되는 결과는 마우스에 최적입니다. 마우스는 새로운 냄새에 강한 반응을 보여, 신속하게 길들. 이 방법의 주요 단계 중 하나는 악취의 제조이다. 조사는 오염을 방지하기 위해 서로 냄새를 분리하기 위해 상당한주의를 기울 필요가있다. 또 다른 중요한 측면은 면봉의 표현이다. 마우스가 팁을 조사 할 수 있지만, 끝에 찢어지지 않도록 조사는면 팁의 최적의 위치 문제를 해결해야…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work is supported by a Baylor University Research Council grant and by a research grant from the Epilepsy Foundation.
Materials
| Mouse cage | Allentown | Standard mouse cage | |
| Wire lid | Allentown | BCU Mouse WBL 2500 | |
| Bedding | Harlan | 7090 Sani-Chips | |
| Cotton swabs | VWR | 89031-270 | 6” wooden handle |
| Banana extract | McCormick | ||
| Almond extract | McCormick | ||
| Laboratory tape | VWR | 89098-062 | |
| Stop watch | VWR | 62374-000 | |
| Nitrile gloves | VWR | 82026 | |
| Timing device | VWR | 61161-350 | |
| 15 mL conical tubes | VWR | 89003-294 | |
| 2 L beakers | Pyrex | 1003 | |
| Parafilm | Parafilm | PM-992 | 4” x 250’ |
| 1 L bottle with cap | VWR | 89000-240 |
Riferimenti
- Doty, R. L. Odor-guided behavior in mammals. Experientia. 42, 257-271 (1986).
- Restrepo, D., Arellano, J., Oliva, A. M., Schaefer, M. L., Lin, W. Emerging views on the distinct but related roles of the main and accessory olfactory systems in responsiveness to chemosensory signals in mice. Horm Behav. 46, 247-256 (2004).
- Keverne, E. B. Importance of olfactory and vomeronasal systems for male sexual function. Physiol Behav. 83, 177-187 (2004).
- Gregg, B., Thiessen, D. D. A simple method of olfactory discrimination of urines for the Mongolian gerbil, Meriones unguiculatus. Physiol Behav. 26, 1133-1136 (1981).
- Yang, M., Crawley, J. N. Simple behavioral assessment of mouse olfaction. Curr Protoc Neurosci. Chapter 8 (Unit 8 24), (2009).
- Pan, Y. W., Kuo, C. T., Storm, D. R., Xia, Z. Inducible and targeted deletion of the ERK5 MAP kinase in adult neurogenic regions impairs adult neurogenesis in the olfactory bulb and several forms of olfactory behavior. PLoS ONE. 7, e49622 (2012).
- Wesson, D. W., Levy, E., Nixon, R. A., Wilson, D. A. Olfactory dysfunction correlates with amyloid-beta burden in an Alzheimer’s disease mouse model. J Neurosci. 30, 505-514 (2010).
- Fadool, D. A., et al. Kv1.3 channel gene-targeted deletion produces ‘Super-Smeller Mice’ with altered glomeruli, interacting scaffolding proteins, and biophysics. Neuron. 41, 389-404 (2004).
- Arakawa, H., Arakawa, K., Blanchard, D. C., Blanchard, R. J. Scent marking behavior in male C57BL/6J mice: sexual and developmental determination. Behav Brain Res. 182, 73-79 (2007).
- Baum, M. J. Sexual differentiation of pheromone processing: links to male-typical mating behavior and partner preference. Horm Behav. 55, 579-588 (2009).
- Ferguson, J. N., et al. Social amnesia in mice lacking the oxytocin gene. Nat Genet. 25, 284-288 (2000).
- Yang, M., et al. Low sociability in BTBR T+tf/J mice is independent of partner strain. Physiol Behav. 107, 649-662 (2012).
- Best, J. D., et al. Non-associative learning in larval zebrafish. Neuropsychopharmacology. 33, 1206-1215 (2008).
- Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish. Proc Natl Acad Sci U S A. , (2011).
- Sorge, R. E., et al. Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents. Nat Methods. 11, 629-632 (2014).
