Summary

非侵襲的気管挿管と成体ラットにおける完全な胸腺摘出

Published: December 29, 2014
doi:

Summary

Rodent thymectomy is a valuable technique in immunological research. Here, a protocol for complete thymectomy in adult rats using a mini-sternotomy along with non-invasive intubation and positive pressure ventilation to minimize perioperative morbidity and mortality is described.

Abstract

新生児げっ歯類における胸腺摘出は、免疫学的研究のために設立され、信頼性のある手順です。しかし、成体ラットに、胸膜破壊からの出血と気胸の合併症は、かなりの死亡率をもたらすことができる。このプロトコルは、ミニ胸骨切開と気管内挿管を利用したラット胸腺摘出の簡単な方法です。挿管は、非侵襲的かつ容易に再現可能な方法で達成し、気胸を防ぐために陽圧換気及び胸膜の中断を最小限にするように注意胸腺切開するために十分な時間を可能にする制御された気道を可能にしている。まだ胸腺の完全な可視化を提供しながら、1.5センチメートル胸骨切開は、縦隔船舶や胸膜との接触を減少させる。縦隔の露光に続いて、胸腺の倍率で鈍的切開によって除去される。胸膜腔は、次に手術用接着剤の塗布に続いてプレ気管筋の縫合閉鎖によって封止されている。ザ·胸部は、その後皮膚の縫合閉鎖が続く胸骨の縫合閉鎖、によって閉鎖される。免疫組織化学(IHC)隔組織の染色、およびフローサイトメトリーによるナイーブT細胞の欠如によって証明されるように、すべてのthymectomiesが完了した、と手順96%の生存率であった。最小限の合併症を伴う完全な胸腺は、胸腺欠損成体ラットにおけるさらなる免疫学的研究のために所望される場合に適している。

Introduction

1960年代初頭以来、胸腺は、中央免疫寛容の開発におけるその重要な役割のために認識されてきた。げっ歯類の胸腺摘出は、リンパ球分化、自己寛容、および同種移植及び腫瘍転移の設定で免疫寛容における胸腺の役割を定義する上で不可欠な手順であることが証明された。ラットの胸腺の除去は、T細胞の枯渇またはネイティブナイーブT細胞の再出現することなく定義されたT細胞集団の養子移入を含む研究を可能にする。

新生児げっ歯類におけるThymectomiesは、信頼性の高い成果1で吸引技術を使用して達成することができる。成体ラットにおいて、この技術は、おおよそ20%の死亡率と関連しており、しばしば不完全な胸腺2になる。一貫して、成体ラットにおける完全な胸腺摘出を達成するために、胸骨正中切開を介して縦隔のオープン露光が必要とされる。しかし、この6% の2- 4 -手順1.5の範囲の全体的な死亡率につながる気管損傷、出血、および気胸を含む合併症に関連している。

最後の20年間胸腺摘出技術の改善は、周術期合併症を減少しており、生存率が改善している。陽圧換気を可能に気管内挿管は、気胸率5軽減されている。挿管の方法は、以前に直接声帯の可視化を使用して、より侵襲性の低い方法に気管に開いた露出の範囲を説明した。挿管手順に関連する合併症は心臓穿刺または上大静脈の裂傷から生じる気管損傷、声帯破裂、意図しない食道挿管、および出血があります。また、胸膜ライニングに下胸腺ローブのすぐ近くには、気胸になることができます。

ここでは、技術を説明平滑末端エンド血管カテーテルおよび経皮的気管照明を用いて気管内挿管の簡単な方法で以下の低侵襲性2cmの皮膚切開を通して胸腺。胸腺摘出1.5センチ胸骨と縦隔を密封し、出血、呼吸器合併症の発生率を最小限にする手術用接着剤の用途に三層の閉鎖を伴う。胸腺及びIHC染色に胸腺組織の欠如後のCD4 +及びCD8 +ナイーブT細胞の消失によって証明されるように、この方法では、確実に完全な胸腺になる。手術時間とペリ手続き死亡率は最小限に抑えている。

Protocol

注:ラットの使用を含むすべての実験手順は、デューク大学の動物実験委員会によって承認されたプロトコルに従って行われた。 気管挿管カニューレの作製ペンチを切断と2インチ14のG angiocathether針の針端をカット。 針の内腔がラジオペンチで閉じピンチ。 ペンチ、オープンルーメン部のエッジまで挟持部を切断し、次いで、30で残りの端部の両側?…

Representative Results

この手順は、成体のルイスラット(n = 26)で行った。平均動作時間が15±3分であった。術中死亡はなかった。平均挿管時間 – 挿管装置にラットの配置から換気の確立には、 – 45±5秒であった。 24匹のラットは、術後の日(POD)POD 4 14. Oneラット開発呼吸困難を経て呼吸困難や出血の証拠のない操作から完全に回復を持っていたし、縦隔を探索するために再手術を受けた。ラットは、肺の虚脱ロ?…

Discussion

完全な胸腺摘出のた​​めの本プロトコルは、合併症を最小限に抑えるように設計外科グルー·アプリケーションとの3層切開の閉鎖と低侵襲性アプローチを提供します。胸腺の完全な除去は、ナイーブT細胞の喪失によってサイトケラチンための縦隔リンパ系組織のIHC染色によって実証された。

、胸膜と胸腺の下葉の密接な関係に起因する心とそのほとんどが周術期の合…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

This work was supported by AI101263 from the National Institutes of Health (T.V.B), and by a grant from The Hartwell Foundation (M.L.M). M.L.M. is a member of the Duke Comprehensive Cancer Center.

Materials

Name of Reagent/ Equipment Company Catalog Number Comments/Description
2" 14-gauge angiocatheter
Operating microscope Zeiss
Warming pad
Heart rate and blood oxygenation monitor for rodents with foot sensors Harvard Apparatus ST1 72-8010, ST1 72-8098 (Rat foot sensor)
Intubation apparatus (plastic with metal bar at the top) See Figure 2 
Small animal anesthesia system with induction box, isoflurane tank and O2 tank Harvard Apparatus ST1 72-6420
Small animal ventilator with tubing CWE 12-02000 (ventilator)and 12-04000 (external valve assembly for mice/rats)
High-intensity Fiber-Optic Illuminator Dolan Jenner EEG 2823M
Student standard pattern forceps Fine Science Tools 91100-16
Fine straight scissors Fine Science Tools 14060-09
Blunt-tipped Shea scissors Fine Science Tools 14105-12
Small Alm retractor (for sternum) Fine Science Tools 17008-07
Blunt Graefe forceps Fine Science Tools 11050-10
Fine Dumont forceps Fine Science Tools 11254-20
5-0 Maxon sutures Ethicon
4-0 Silk sutures (with cutting needle) Ethicon
6-0 Nylon suture Ethicon
Cyanoacrylate glue (Endermil)
Lubrication gel Akorn Animal Health NDC 17478-162-35

Riferimenti

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Citazione di questo articolo
Rendell, V. R., Giamberardino, C., Li, J., Markert, M. L., Brennan, T. V. Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation. J. Vis. Exp. (94), e52152, doi:10.3791/52152 (2014).

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