蛍光タンパク質の発現において<em> Branchiostoma lanceolatum</em>未受精卵へのmRNA注入による

開発中は、単一の細胞は細胞分裂や動きの両方が関与非常に複雑なプロセスで、生物全体を生じさせる。優れた細胞の挙動の力学の基礎となる生物学的原理を理解するために、発生生物学者は、蛍光ベースのインビボイメージング技術を使用し始めている。特定のこのような細胞膜などの細胞の区画のいずれかの蛍光色素での処理により標識することができる、特異性および組織浸透¹の欠如によって妨げられアプローチ、または蛍光タンパク質^2をコードする外因性mRNAの胚に特異的な導入による。別の技術は、mRNAのような外因性化合物の効率的な送達のために用いることができる。これらには、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、微粒子、リポフェクションおよび形質導入^3,4との衝撃が、これらに限定されない。これらのアプローチの全ては、外来性化合物を導入するために使用することができるが胚を開発し、唯一のマイクロインジェクションは、各セル³内にあらかじめ定義されたと正確な量の適用を可能にする。マイクロインジェクション技術は、すべての主要な発達のモデル系^4（ 例えば 、ショウジョウバエ、線虫、ゼブラフィッシュ、カエル、マウス）のためだけでなく、発達のメカニズムの進化を理解することを目的とした比較研究のために使用されるものを含むいくつかの代替モデル^4、のために記載されている（ 例えば 、イソギンチャク、環形動物ワーム、ウニ、ホヤホヤ、ナメクジウオのナメクジウオ）。

一緒にホヤと脊椎動物で脊索動物門を確立Cephalochordatesは、特に、脊索動物の進化と無脊椎動物の祖先^5-8から脊椎動物の多様化を研究するために非常に適したモデルです。ナメクジウオ系統は、脊索動物の進化の過程で非常に初期の発散。 3属（ ブランに細分され、現存cephalochordates、chiostoma、AsymmetronとEpigonichthys）、全体的な解剖学とゲノムアーキテクチャ^5-8の両面脊椎動物に似ている。これまでに記載されているcephalochordatesの約30種のうち、5人は発生学的と発達研究の^6,9のために用意されていますAsymmetronのlucayanum（バハマのナメクジウオ）、Branchiostoma floridae（フロリダナメクジウオ）、Branchiostomaのlanceolatum（欧州ナメクジウオ）、 Branchiostoma belcheri（中国語ナメクジウオ）とBranchiostoma吸虫 （日本ナメクジウオ）。これらの種の3（B.のlanceolatum、B. belcheriおよびB. japonicumの ）の熟した大人の繁殖期^10,11の間にオンデマンド産卵するように誘導することができる。さらに、少なくともBのlanceolatum、効率的な産卵も、それによって研究所のために、この特定のナメクジウオ種がアクセスできるように、人工海水¹²に誘導することができる自然海水へのアクセス権を持っていないIES。 Bの組み合わせ、 lanceolatum、そのようなマイクロインジェクションなどの効率的な配信方法で胚に便利で信頼性の高いアクセスのため、これまでに^{13〜15、（B。floridae}およびB. belcheriの両方で）ナメクジウオで開発された唯一の送達技術は、の開発を可能にします系統tracing-と動的な細胞の挙動に基づくアプローチを含む整体技術の新規スイート。

B.蛍光タンパク質を発現するmRNAの効率的なマイクロインジェクションのためのプロトコルlanceolatum胚 、したがって開発されました。さらに、Bのライブイメージングのための基本的なツールキットを提供するためにlanceolatum胚 、ベクター系は、膜結合および蛍光タンパク質の核発現を可能にするように開発された。膜標的化するための、強化緑色蛍光タンパク質（EGFP）はmCherryをとeGFPの人間HRAS CAAXボックスと核局在化したこと融合させたゼブラフィッシュヒストン2B（H2B）エクソン（ 図1、補足ファイル1）への融合によって得られる。また、Bのタンパク質翻訳を最適化することを目標に、構築物のコザック配列及びコドンは改変されていると使用に適応lanceolatum。まとめると、ここで提示注入法および発現ベクターは、特に、最新の蛍光ベースの生体内イメージング技術を用いて分析し、cephalochordatesための新たな実験的アプローチを生成するための基礎として役立つ。