Een nieuwe methode van de Drug aan Multiple zebravis (<em> Danio rerio</em>) En de kwantificering van Terugtrekking

De zebravis (Danio rerio) is een klein teleost soorten van oorsprong uit India, dat is een bruikbaar model organisme voor gedragsverandering ¹ en medisch onderzoek ^2,3. Zebravis worden ook vaak gebruikt bij het testen van verschillende farmacologische stoffen om hun impact op het gedrag karakteriseren. Diverse doseringen en schema van toediening zijn gebruikt om het gedrag van de zebravis na de toediening van verbindingen zoals stimulantia ^4, anxiolytica ⁵ en ethanol ^6-8 onderzoeken.

Ons laboratorium heeft het effect van verschillende schema ethanol toediening op zebravis angst en beweging in de goed gevalideerde licht / donker assay ^{9, 20,} ook bekend als de scototaxic assay onderzocht. Een nieuwe wijze van toediening ethanol werd ontwikkeld om de efficiëntie voor herhaalde dagelijkse toediening toenemen gedurende een lange periode (21 dagen) ⁶ </sup>. Eerder gebruikte werkwijzen waren praktisch echter zochten we een methode verrekening verminderd met bijbehorende tijdskosten ontwikkelen, en men tegelijkertijd nauwkeurig tijdgestuurde toediening van het geneesmiddel van belang grote aantallen vissen. In traditioneel onderzoek met behulp van ethanol, worden zebravis gesaldeerd en overgebracht van de ene naar de andere tank met de juiste mengsel van ethanol en water ^10-12. Hoewel deze methode is algemeen aanvaard, kan saldering zebravis de variabiliteit in de tijd genomen om te introduceren en te verwijderen van de vis uit de drug oplossing te verhogen. Daarom kan de exacte blootstelling aan de verbinding van belang variëren in de loop van een experiment met herhaalde toediening. Een methode die bronnen van fouten als gevolg van de variabiliteit in het vervoer tijden reduceert is dus wenselijk. Met onze methode kunnen we alle vissen tegelijk bewegen, waardoor identieke doseertijd per vis. Na blootstelling aan ethanol (hier beschreven) kunnen zebravissen worden getest in elke number gedrags- testen, waaronder die angst beoordelen. Doseren groepen van vis met behulp van de nieuwe methode heeft praktische toepassingen buiten het vermogen om nauwkeurig te repliceren en te standaardiseren dosering tussen onderwerpen en over groepen van vis. De komst van nieuwe software die het mogelijk maakt voor het volgen van meerdere vissen in een keer kan zien onderzoekers maken gebruik van onze methoden om herhaalbaarheid en nauwkeurigheid in hun experimenten. Gezien het wijdverbreide gebruik van zebravis als modelorganisme voor Behavioral Neuroscience, zal deze methode de efficiëntie en bruikbaarheid in de toekomst farmacologische studies te verhogen.

In het huidige paradigma, werd een herhaalde doseringsschema gebruikt die ongeveer weerspiegelt de menselijke drinken schema. Vissen werden willekeurig toegewezen aan één van drie groepen: controle, dagelijkse matige, of wekelijkse-binge. Het doseringsschema was 21 dagen duurden gekozen omdat het aanzienlijk belichtingstijden in eerdere studies ⁷ overschreden. Controlevissen ontvangen nul alcohol, ontving dagelijks matige vis 0,2% alcohol een keer per dag, en wekelijks binge-vis ontvingen 1,4% alcohol een keer per week. Het licht / donker taak werd gebruikt om angst te beoordelen na 2 dagen van terugtrekking. Dit is een relatief eenvoudige test te beheren met een rechthoekige arena waarin de wanden enerzijds zijn wit en anderzijds donker ⁹ gebruikt. Volwassen zebravissen robuust voorkeur aan de donkere kant van de arena onder controle condities ^6,9,13. Toegenomen angst is operationeel gedefinieerd als aanzienlijk meer tijd in de donkere zone en verminderde angst kan worden aangenomen wanneer de vis besteedt relatief meer tijd in de lichte zone. Met motion-tracking software, kunnen andere informatieve variabelen ook worden gekwantificeerd, zoals gemiddelde snelheid, immobiliteit, meanderende, en zone overgangen ^14.

De dosering methode ontwikkeld in ons laboratorium kan worden toegepast op elk onderzoek waarbij in water oplosbare verbindingen worden toegediend aan één of meer zebrafish. Veel andere farmacologische middelen die kunnen profiteren van deze methodiek worden momenteel getest in de zebravis. Gewoonlijk geteste verbindingen omvatten nicotine, chloordiazepoxide, buspiron en scopolamine, die zijn opgelost in een soortgelijke wijze ethanol; door mengen van de juiste hoeveelheid van de chemische stof in water. Daarom is het algemene toepassingsgebied van deze procedure is veel breder en niet beperkt tot ethanol. Bovendien na toediening van geneesmiddelen voor meerdere dagen, de licht / donker taak is slechts één van vele gedragstesten die kunnen worden toegepast. Na toediening van het geneesmiddel of tijdens de terugtrekking, andere populaire assays die kunnen worden gebruikt zijn onder andere de roman tank duiken-test ¹⁵ en tests van sociaal gedrag zoals shoaling ^16. De volgende procedure zal een efficiënte methode van herhaaldelijk overbrengen groepen van vis of van individuele vissen in oplossingen die een farmacologische verbinding van belang te schetsen. Bovendien, het proces van het testen van angst met de licht / donker-testin groepen van vis die in intrekken na blootstelling aan lange lijsten van alcohol toediening worden beschreven.