A seguito in tempo reale l'impatto dei fattori di virulenza pneumococco in un acuto mouse Polmonite modello tramite batteri bioluminescenti

Infezioni del tratto respiratorio causate da virus o batteri rimangono uno dei problemi acquisite in comunità o cliniche più comuni in tutto il mondo provocando circa un terzo di tutte le morti in tutto il mondo. Le specie batteriche chiave sono Haemophilus influenzae e Streptococcus pneumoniae ^2. Tuttavia, queste specie batteriche sono normalmente costituenti comuni delle naturali flora del tratto respiratorio. Così carrozza batterica è anche di certo rischio di malattia invasiva e seconda dello stato immunitario o predisposizioni degli individui. La colonizzazione asintomatica è attivato per infezioni invasive. Streptococcus pneumoniae è il patogeno principale della polmonite acquisita in comunità (CAP) e una delle più comuni cause di batteriemia negli esseri umani. Negli individui sani S. pneumoniae (pneumococco) sono spesso colonizzatori asintomatici e innocuo del tratto respiratorio superiore, dove si trovano a confrontarsi con i batteri non patogenidella flora residente, ma anche con agenti patogeni come Haemophilus spp. o Staphylococcus aureus e la prima linea di difesa del sistema immunitario umano. Tariffe di spedizione sono più alti nei bambini (37%) e persino più alto in centri diurni affollati (58%), ^3-5. La popolazione più giovane e gli anziani, ricevendo il pneumococco via di trasmissione per aerosol da vettori e secrezioni naso-faringei ^6, appartengono ai gruppi ad alto rischio e la vaccinazione utilizzando uno dei vaccini pneumococcico coniugato (PCV10 o PCV13 nei bambini e 23-valente polisaccaridico PPSV23 negli adulti) è raccomandato negli Stati Uniti (US) e molti paesi europei ^4. Il PPSV23 copre sierotipi responsabili di ~ 90% delle malattie pneumococciche batteriemia negli Stati Uniti e in Europa, prevenzione delle malattie pneumococciche così efficiente invasive (IPD) negli adulti, mentre i PCVs coprono i sierotipi più frequenti nei bambini. Di conseguenza, IPD a causa di tipi di vaccino (VT) sono ridusierotipi non vaccinali CED ma che mostrano un alto potenziale di virulenza e di resistenza agli antibiotici sono emerse ^4,7-12. Il rinofaringe come il serbatoio è il punto di partenza per pneumococchi a diffondersi i seni o le orecchie di mezza avvio infezioni locali nocivi. Più importante, pneumococchi diffondere direttamente attraverso le vie respiratorie di bronchi e del polmone con conseguente pericolo di vita CAP ^4,13. Infezioni polmonari sono spesso accompagnate con il tessuto e distruzione barriera, permettendo così al patogeno di diffondersi nel sangue e causando IPD. L'incidenza di PAC e IPD sono più elevati nei soggetti immunocompromessi o agli estremi di ^4,13 anni. Le circostanze responsabili per la conversione da un commensale con un patogeno con elevata virulenza sono ancora in discussione. Tuttavia, oltre a cambiamenti nella suscettibilità dell'ospite e adattamento evolutivo accompagnato con maggiore virulenza e l'aumento delle resistenze agli antibiotici sono stati suggeriti per avere un impatto cruciale sul pneinfezioni umococcal ^14-16.

L'agente patogeno è dotato di una molteplicità di adesine che mediano contatto intimo alle cellule della mucosa epiteliali. Dopo aver superato il muco delle vie respiratorie, l'adesione pneumococcica alle cellule ospiti è facilitato tramite interazioni dirette di adesine-superficie esposta con recettori cellulari e sfruttando componenti della matrice extracellulare o proteine ​​del siero come colmare le molecole ^4,17,18. Agenti patogeni come versatili pneumococchi sono anche dotati di fattori coinvolti in evasione dei meccanismi di difesa dell'ospite immunitario. Inoltre, essi hanno la capacità di adattarsi a diversi ambienti host quali il polmone, del sangue e del liquido cerebrospinale (CSF), rispettivamente, ^5,17,19,20.

L'impatto dei fattori batterici sulla patogenesi e di accoglienza infiammatoria risposte è studiato in modelli animali sperimentali di polmonite, batteriemia o meningite ^21-25. Pur essendo un agente patogeno umano, questi modelli sono noill-istituito per decifrare tropismo tissutale pneumococco, meccanismi di virulenza, o protectivity dei candidati vaccino pneumococcico. Il background genetico dei ceppi inbred topo determina la suscettibilità di pneumococchi. Topi BALB / c intranasale infettate con pneumococchi sono risultati essere resistenti, mentre CBA / Ca e SJL topi erano più suscettibili contro le infezioni pneumococciche ^22. Ciò implica che, simili agli esseri umani, il background genetico e dei meccanismi di difesa dell'ospite determinano il risultato dell'infezione. Pertanto, sono necessari ulteriori sforzi per svelare la resistenza loci nel genoma dei topi meno suscettibili alle infezioni da pneumococco. I risultati hanno portato a cambiamenti in vivo protocolli di virulenza in. Invece dei consanguinei topi BALB / c, spesso utilizzate in passato, i altamente sensibili CD-1/MF1 ceppi outbred topi sono oggi spesso utilizzati per studiare l'effetto di virulenza pneumococcica o idoneità perdita-di-funzione di fattori ^26-28. Inoltre, la disponibilitàdi pneumococchi bioluminescenti e tecniche di imaging ottico permette la bioluminescenza bioimmagini in tempo reale delle infezioni. In pneumococchi la cassetta genica luxABCDE ottimizzato (plasmide Paul-A Tn 4001 luxABCDE Km ^r) è stata inserita in un sito di integrazione singola del cromosoma da trasposone mutagenesi. Pneumococchi bioluminescenti sono stati impiegati per valutare l'attenuazione dei mutanti di pneumococco con deficit di virulenza o di idoneità fattori e la loro traslocazione da un sito anatomico all'altro ^26,28-31.

Qui forniamo un protocollo per la bioimmagini di infezioni pneumococciche in una polmonite o modello murino di sepsi. Amplificazione e diffusione di pneumococchi bioluminescente in topi infettati per via intraperitoneale, intranasale o possono essere facilmente monitorati nel tempo utilizzando un sistema di imaging ottico e lo stesso animale a tempi diversi.