Techniek voor het bestuderen van geleedpotigen en microbiële gemeenschappen binnen Tree Tissues

1. Floëem Selectie- en Verwijdering van de Boom Kies een boom met bijzondere kenmerken. Verzamel floëem van dennen (dwz, bomen in het geslacht Pinus), omdat ze hebben een kenmerkende floëem laag die is enkele millimeters dik. 18,27 Zodra een boom ligt dat enkele lagere takken heeft, inspecteren voor enige andere gebreken zoals insecten aanvallen en / of pathogenen. U kunt ook gebruik maken van floëem van andere coniferen, zoals sparren in floëem sandwiches. 9 Overige bomen soorten kunnen geschikt zijn voor floëem verwijdering zoals hardhout. OPMERKING: Naald bomen met grote kronen hebben meestal de dikste floëemweefsel. Om de hoeveelheid floëem te maximaliseren, is het het beste om bomen die enkele gebreken en takken op de stam (stam) hebben gesneden. Pine soorten die best zelf-snoeiwerk zijn. Floëem typisch dikste tijdens het groeiseizoen en dikker hoger de romp dan nabij de grond. Floëem is soms moeilijk om remove van bomen tijdens de herfst of winter seizoenen. Snijd een boom naar beneden of gebruik onlangs gesneden logs om floëemweefsel verkrijgen. Kies een dalende richting die schade aan de boom en in de buurt bomen zal minimaliseren. Cut vertakt de stam om gemakkelijker toegang te blaffen materialen tijdens floëem kunnen blijven zitten. Zodra een boom wordt gesneden (geveld; laten vallen op de grond) begint het schrapen van de bast van de stam met een scherp mes gelijkspel (Fig 1A.). Schraap een gebied van de bast totdat het floëem laag wordt bereikt. OPMERKING: De floëem laag is typisch lichter van kleur (bijvoorbeeld crème kleur) en vochtig, terwijl de buitenste schors droger en donkerder (figuur 1B.). Wees extra voorzichtig het floëem niet te schrapen. Het gebied van de schors afgeschraapt afhankelijk van de grootte van het floëem stuk (s) nodig. Nadat de bast is verwijderd, snijd een schets van het floëem stuk met een scherp mes. Controleer het mes snijdt helemaal naar het xyleem (fig. 2A). Om het floëem te verwijderen, te beginnen bij een hoek van het floëem stuk met behulp van de vingers om voorzichtig afpellen het floëem. Gebruik een mes om te helpen bij het schrapen het floëem van de houtvaten. Trek net het floëem uit tot het hele stuk wordt verwijderd. OPMERKING: Floëem pelt meestal af van de boom makkelijkste in de zomer. Voor floëem dat is bijzonder moeilijk te verwijderen is, kan een spatel-vormige hulpmiddel te helpen bij de inspanning. Plaats het floëem stuk onmiddellijk in een steriele zak. Voor het beste resultaat, vacuum sluit de zak (Fig. 2B) of, bij gebruik van ziploc zakken, verwijder alle lucht uit de zak. Dit verhoogt de levensduur van het floëem. Eventueel plaatst u meerdere stukken van floëem in één zak. WINKEL floëem in luchtdichte zakken iets boven het vriespunt (tussen 1 en 10 ° C) om de versheid te behouden. 2. Het creëren van de Floëem Sandwich Snij twee gelijke stukken helder acryl, polycarbonaat, of een dergelijke harde, doorzichtig materiaal (bijvoorbeeld glas) licht grootr dan het stuk van floëem (Fig. 2C). Rond de randen van de acryl te voorkomen dat de hoeken scheurt de Parafilm afdichting. Dit protocol maakt gebruik van een 1/8 in. Dik helder acryl. OPMERKING: De grootte van de gesneden stukken afhankelijk van de behoeften van de betreffende organisme en de duur van de studie. Bijvoorbeeld, een paar bastkevers gebruikt 4 dm2 van floëem gedurende maanden, maar alleen 1 dm2 indien het onderzoek plaatsvindt binnen enkele dagen. Boor een gat in één van de acryl stukken opneming van onderzoek organisme (n) mogelijk. De grootte en aantal gaten afhankelijk van de doelen (Fig. 2D). Voorafgaand aan het plaatsen van het floëem tussen de acryl stukken, steriliseren het acryl oppervlak (met> 70% ethanol) of, bij gebruik van nieuwe acryl, verwijder de beschermende folie. Leg de verse stuk floëem tussen de steriele acryl stukken. Plaats de acrylstuk met het gat (en) op de binnen- of buitenzijde van het floëem, whichever nodig. Typisch gezicht van de buitenzijde van het floëem (kant die schors op het had) naar de ingang gaten. 3. Het afdichten van de Floëem Sandwich Een tijdelijke afdichting rond het floëem sandwich maken gebruik 2 in. Parafilm brede stroken getrokken rond de randen van het floëem sandwich (fig. 2C). Als alternatief gebruikt een polyvinylideenchloride wikkel om de randen te verzegelen. 6 Plaats vervolgens een klem aan beide zijden van de sandwich acryl aan het floëem knijpen. Zorg ervoor dat het gehele oppervlak is geklemd omlaag om de lucht ruimte tussen de acryl en floëem (Fig 2C) te voorkomen. Als dit niet goed geklemd, kan exemplaren tussen de acryl en floëem bewegen. Het creëren van een semi-permanente afdichting toe een niet-lijmen of epoxy vaseline rond het floëem. Zorg ervoor dat het materiaal volledig omringt het floëem. Vervolgens gebruikt klemmen of schroeven met moeren (kan nodig zijn om gaten te boren van tevoren) om de acryl strak om het floëem te houden.De broodjes alleen levensvatbaar blijven tot één of twee maanden. Afhankelijk van de zuurstofbehoefte van de studie organismen, voeg een luchtfilter op één of meer zijden van de sandwich. Dit zal de lucht in het floëem sandwich aan te gaan, maar te beperken waterverlies uit het floëem. We gebruiken eenvoudige koolstoffilters dat het risico van schimmel en bacteriële verontreiniging te verminderen. Voor studie exemplaren die in- en uitstappen op wil vereisen, vervangt een van de acryl-stukken met hout of soortgelijk materiaal dat een insect kan boren zich in. Dit is bijzonder belangrijk voor de waarneming van houtboorders, want na larvale staat het floëem laag is voltooid, dan droegen ze in het xyleem. Om proefpersonen verhinderen de toegang gaten verlaten, plaatst kleine petrischalen (of andere objecten, tape) over de gaten, het blokkeren ontsnappen. Sinds organismen die in deze ruimten bevinden zijn wennen aan lage lichtniveaus, kan het nodig zijn om de broodjes te plaatsen in een donkere kamer of een doos, of plaats oPaque materiaal op de top aan het licht af. 4. Observeren Organismen in het floëem Sandwich Introduceren studie specimens in ingangsgat van het floëem sandwich (Fig. 2D). Observeer exemplaren met behulp van een dissectie microscoop onder een rood licht of wit licht instellen op een lage stand (fig. 2E). Om de activiteiten of de groei van specimens in de floëem sandwich neem een ​​camera of video camera aan de microscoop te bevestigen. Bevestig speciale videocamera's om de microscoop oculair (Fig. 2E & F). Voor zeer kleine organismen zoals mijten, nematoden, en pseudo-schorpioenen, gebruik dan een high definition video camera op de microscoop. Om geluiden op te nemen, plaatst microfoons in het gat van de vermelding van het floëem sandwich of via de zijkant van het floëem sandwich. Omdat de ingang gat klein is, gebruik dan een kleine microfoon, zoals een electret condensator microfoon. Om op te nemen vanaf de kant of het vlak vanhet floëem sandwich gebruiken een piëzo-element (fig. 3B). Om het geluid weer, maken gebruik van dezelfde piëzo-element of bevestig een tactiele transducer (Excitor) aan het oppervlak van de bovenkant of onderkant van de acryl.