Técnica para el estudio de los artrópodos y las comunidades microbianas dentro de los tejidos del árbol

1. floema Selección y Separación del Árbol Seleccione un árbol con características particulares. Recoger floema de pinos (es decir, los árboles en el género Pinus), ya que tienen una capa distintiva floema que es de varios milímetros de espesor. 18,27 Una vez que un árbol se encuentra que tiene pocas ramas más bajas, lo examinan para otros defectos, tales como ataques de insectos y / o patógenos. Como alternativa, utilice el floema de otras coníferas como los abetos en sándwiches floema. 9 Otras especies de árboles pueden ser adecuados para la eliminación de floema, tales como maderas duras. NOTA: Los árboles de coníferas con grandes coronas suelen tener el tejido floema más gruesa. Para maximizar la cantidad de floema, lo mejor es cortar los árboles que tienen pocos defectos y ramas en el tronco (tronco) es. Especies de pino que son el trabajo de auto-poda mejor. Floema es típicamente más gruesa durante la temporada de crecimiento y es más grueso más arriba en el tronco de cerca del suelo. Floema es a veces difícil de Removcorreo de los árboles durante las temporadas de otoño o invierno. Cortar un árbol hacia abajo o utilizar los registros recientemente cortados para obtener tejido del floema. Elija una dirección de caída que reduzca al mínimo el daño al árbol, así como los árboles cercanos. Ramas cortar el tronco para permitir un acceso más fácil a los materiales de la corteza durante la extracción del floema. Una vez que se corta un árbol (talado; caído en el suelo) comenzará el raspado de la corteza del tronco con una cuchilla afilada empate (Fig. 1A). Raspe un área de la corteza hasta que se alcanza la capa de floema. NOTA: La capa de floema es típicamente un color más claro (por ejemplo, el color crema) y húmedo, mientras que la corteza exterior es más seca y de color más oscuro (Figura 1B.). Tenga especial cuidado de no raspar el floema. La zona de la corteza de raspado depende del tamaño de la pieza (s) floema necesario. Después de retirar la corteza, cortar un contorno de la pieza floema con un cuchillo afilado. Asegúrese de que el cuchillo corta todo el camino hasta el xilema (Fig. 2A). Para quitar el floema, comience en una esquina de la pieza floema usando los dedos para pelar cuidadosamente hacia atrás el floema. Utilice un cuchillo para ayudar a raspar el floema de la xilema. Continuar tirando del floema fuera hasta que se retire toda la pieza. NOTA: floema normalmente se despega del árbol más fácil del verano. Para floema que es extremadamente difícil de quitar, una herramienta en forma de espátula puede ayudar en el esfuerzo. Coloque la pieza de floema de inmediato en una bolsa estéril. Para obtener los mejores resultados, vacío sellar la bolsa (Fig. 2B) o, si el uso de bolsas ziploc, eliminar todo el aire de la bolsa. Esto aumenta la longevidad del floema. Opcionalmente, colocar varias piezas de floema en una bolsa. Floema tienda en bolsas herméticas ligeramente por encima de la congelación (entre 1 y 10C) para retener su frescura. 2. Crear el floema Sandwich Cortar dos piezas iguales de acrílico transparente, policarbonato o un material duro, claro similar (por ejemplo, vidrio) ligeramente grander que la pieza de floema (Fig. 2C). Alrededor de los bordes de la de acrílico para evitar que las esquinas se rompa el sello Parafilm. Este protocolo utiliza un 1/8 pulg. De espesor de acrílico transparente. NOTA: El tamaño de las piezas cortadas depende de las necesidades del organismo del sujeto y de la duración del estudio. Por ejemplo, un par de escarabajos de la corteza utiliza 4 dm 2 de floema en un período de meses, pero sólo necesitará 1 dm 2 si el estudio se lleva a cabo dentro de varios días. Haga un agujero en una de las piezas de acrílico para permitir la entrada del organismo (s) de estudio. El tamaño y el número de orificios depende de los objetivos (Fig. 2D). Antes de colocar el floema entre las piezas de acrílico, esterilizar la superficie de acrílico (con> 70% de etanol) o, si el uso de nuevo de acrílico, retire la película protectora. Coloque la pieza fresca de floema entre las piezas de acrílico estériles. Orient la pieza de acrílico con el orificio (s) en el lado interior o exterior de la floema, whicheveSe necesita r. Típicamente, frente a la cara exterior de la floema (lado que tenía la corteza en él) hacia los orificios de entrada. 3. Sellar el floema Sandwich Para crear un sello temporal en todo el sándwich floema, utilice 2 en. Tiras anchas Parafilm tirados alrededor de los bordes del sándwich floema (Fig. 2C). Alternativamente, usar una envoltura de cloruro de polivinilideno para sellar los bordes. 6 A continuación, colocar una abrazadera en cada lado del sándwich para exprimir el acrílico para el floema. Asegúrese de que toda la superficie se sujeta hacia abajo para evitar que el espacio de aire entre el acrílico y el floema (figura 2C). Si no sujeta adecuadamente, las muestras pueden moverse entre el acrílico y el floema. Para crear un sello semi-permanente añadir un epoxi o vaselina no encolado alrededor del floema. Asegúrese de que el material rodea completamente el floema. A continuación, utilice abrazaderas o tornillos con tornillos (puede que tenga que perforar los agujeros antes de tiempo) para sostener el acrílico ajustado al floema.Los sándwiches sólo permanecen viables durante un máximo de uno o dos meses. Dependiendo de las necesidades de oxígeno de los organismos de estudio, añadir un filtro de aire en uno o más lados del sándwich. Esto permitirá que el aire entre en el sándwich floema pero limitar la pérdida de agua desde el floema. Utilizamos filtros de carbón simples que también reducen el riesgo de hongos y la contaminación bacteriana. Para las muestras de estudio que requieren la entrada y salida a voluntad, reemplazar una de las piezas de acrílico con madera o material similar que un insecto puede perforan. Esto es particularmente importante para la observación de barrenadores de la madera, porque después de que se complete su estado larval en la capa de floema, que a continuación se clavaron en el xilema. Para evitar que los sujetos de prueba desde que sale de los orificios de entrada, coloque pequeñas placas de Petri (u otros objetos, cinta) en los orificios de escape, el bloqueo. Desde los organismos que se encuentran en estos espacios son acostumbrar a los bajos niveles de luz, puede ser necesario colocar los sándwiches en una habitación o una caja oscura, o lugar omaterial de paque en la parte superior para bloquear la luz. 4. Los organismos de observación en el floema Sandwich Introducir las muestras de estudio en el orificio de entrada del sándwich floema (Fig. 2D). Observar las muestras usando un microscopio de disección con una luz roja o luz blanca fija en un nivel bajo (Fig. 2E). Para grabar las actividades o el crecimiento de las muestras dentro del sándwich floema adjuntar una cámara o cámara de vídeo para el microscopio. Conecte cámaras de video especiales para el ocular del microscopio (Fig. 2E y F). Para organismos muy pequeños tales como los ácaros, nematodos, y pseudoscorpions, utilizar una cámara de vídeo de alta definición adjunta al microscopio. Para grabar sonidos, micrófonos insertar en el orificio de entrada del sándwich floema o a través del lado del sándwich floema. Debido a que el orificio de entrada es pequeño, use un pequeño micrófono como un micrófono de condensador electret. Para grabar desde la cara o superficie deel sándwich de floema utilizar un elemento piezoeléctrico (Fig. 3B). Para reproducir el sonido, utilice el mismo elemento piezoeléctrico o adjuntar un transductor táctil (excitador) a la superficie de la parte superior o inferior del acrílico.