Technique pour l'étude des arthropodes et communautés microbiennes dans les tissus des arbres

1. phloème Sélection et suppression de l'arbre Sélectionnez un arbre avec des caractéristiques particulières. Recueillir phloème de pins (c.-à-arbres du genre Pinus) car ils ont une couche distinctif phloème qui est de plusieurs millimètres d'épaisseur. 18,27 Une fois un arbre se trouve qui a peu de branches basses, l'inspecter pour d'autres défauts tels que des attaques d'insectes et / ou des agents pathogènes. Vous pouvez également utiliser le phloème d'autres conifères comme les épinettes dans les sandwichs du phloème. 9 autres espèces d'arbres peuvent être appropriés pour l'élimination phloème comme les feuillus. NOTE: Les conifères avec de grandes couronnes ont généralement le tissu du phloème épais. Pour maximiser la quantité de phloème, il est préférable de couper les arbres qui ont peu de défauts et de branches sur le tronc (tronc). espèces de pins qui sont de travail auto-élagage meilleur. Phloème est généralement plus épais au cours de la saison de croissance est plus épais et plus haut sur le tronc que près du sol. Phloème est parfois difficile de REMOVe des arbres pendant les saisons d'automne et d'hiver. Couper un arbre vers le bas ou utiliser les journaux récemment coupés pour obtenir le phloème. Choisissez une direction de la chute qui permettra de minimiser les dommages à l'arbre ainsi que les arbres à proximité. Branches couper le tronc pour permettre un accès plus facile aux matériaux de l'écorce lors de l'enlèvement du phloème. Une fois qu'un arbre est coupé (abattu; chuté sur le sol) commencer gratter l'écorce du tronc avec une lame de tirage forte (figure 1A).. Gratter une zone de l'écorce jusqu'à ce que le phloème est atteint. REMARQUE: Le phloème est généralement de couleur plus claire (par exemple, la couleur de la crème) et humide, tandis que l'écorce externe est plus sèche et de couleur plus foncée (Fig 1B.). Faites attention de ne pas égratigner le phloème. Le domaine de l'écorce raclée dépend de la taille de la pièce phloème (s) requis. Après l'écorce est enlevée, couper un contour de la pièce phloème avec un couteau pointu. Assurez-vous que le couteau coupe tout le chemin à la xylème (Fig. 2A). Pour supprimer le phloème, commencer dans un coin de la pièce phloème avec les doigts pour décoller délicatement l'phloème. Utilisez un couteau pour aider à racler le phloème de xylème. Continuer à tirer le phloème jusqu'à ce que la totalité de la pièce est retirée. REMARQUE: phloème pèle généralement hors de l'arbre le plus facile en été. Pour phloème qui est extrêmement difficile à enlever, un outil en forme de spatule peut aider à l'effort. Placez le morceau phloème immédiatement dans un sac stérile. Pour de meilleurs résultats, sceller le sac vide (Fig. 2B) ou, si vous utilisez des sacs Ziploc, enlever tout l'air du sac. Cela augmente la longévité du phloème. En option, placez plusieurs morceaux de phloème dans un sac. phloème de magasin dans des sacs hermétiques légèrement au-dessus de congélation (entre 1 et 10 ° C) pour conserver sa fraîcheur. 2. Création du phloème Sandwich Coupez deux morceaux égaux en acrylique transparent, le polycarbonate, ou un matériau dur et clair similaire (par exemple, le verre) légèrement grandr que le morceau de phloème (Fig. 2C). Sur les bords de l'acrylique pour empêcher les coins de déchirement du joint Parafilm. Ce protocole utilise un 1/8. Acrylique épais et clair. REMARQUE: La taille des morceaux coupés est fonction des besoins de l'organisme sujet et la durée de l'étude. Par exemple, une paire de scolytes utilise 4 dm 2 de phloème sur une période d'un mois, mais seulement besoin de 1 dm 2 si l'étude a lieu dans quelques jours. Percez un trou dans l'une des pièces d'acrylique pour permettre l'entrée de l'organisme (s) de l'étude. La taille et le nombre de trous dépend des objectifs (Fig. 2D). Avant de placer le phloème entre les pièces acryliques, stériliser la surface acrylique (avec> 70% d'éthanol) ou, si vous utilisez nouvelle acrylique, retirez le film de protection. Placez le morceau frais de phloème entre les pièces d'acrylique stériles. Orienter la pièce d'acrylique avec le trou (s) sur la face intérieure ou extérieure du phloème, whichever est nécessaire. Typiquement, face à la face extérieure de la phloème (côté que l'écorce a sur elle) vers les trous d'entrée. 3. Sceller le phloème Sandwich Pour créer un joint d'étanchéité temporaire autour du sandwich phloème, en utilisant deux. Larges bandes de Parafilm tiré sur les bords de la liber en sandwich (Fig. 2C). En variante, en utilisant une pellicule de chlorure de vinylidène pour sceller les bords. 6 Ensuite, placer un dispositif de serrage de chaque côté du sandwich à presser la acrylique pour le phloème. Assurez-vous que toute la surface est serrée vers le bas pour éviter l'espace aérien entre l'acrylique et le phloème (figure 2C). Si pas serré correctement, les échantillons peuvent se déplacer entre l'acrylique et le phloème. Pour créer un joint d'étanchéité semi-permanent ajouter un époxy ou de pétrole non-collant gelée autour du phloème. Assurez-vous que le matériau entoure complètement le phloème. Ensuite, utilisez des pinces ou vis à vis (peut-être besoin de percer des trous à l'avance) pour maintenir le acrylique serré pour le phloème.Les sandwiches ne restent viables pendant un ou deux mois. En fonction des besoins en oxygène des organismes d'étude, ajouter un filtre à air sur un ou plusieurs côtés du sandwich. Cela permettra à l'air de pénétrer dans le sandwich phloème mais de limiter la perte de la phloème de l'eau. Nous utilisons des filtres à charbon simples qui réduisent également le risque de contamination fongique et bactérienne. Pour les échantillons de l'étude qui nécessitent entrée et sortie à volonté, remplacer l'un des morceaux de bois ou acrylique avec un matériau similaire qu'un insecte peut ennuyer en. Ceci est particulièrement important pour l'observation des insectes xylophages, car après leur état larvaire est terminée dans le phloème, ils ont ensuite porté dans le xylème. Pour éviter des sujets d'essai de sortir des trous d'entrée, placer des petites boîtes de Pétri (ou d'autres objets, ruban) sur les trous, évasion blocage. Depuis organismes qui résident dans ces espaces sont habituer à des niveaux faible luminosité, il peut être nécessaire de placer les sandwichs dans une chambre ou boîte noire, ou le lieu omatériau paque sur le dessus pour bloquer la lumière. 4. Constatant organismes dans le phloème Sandwich Présentez spécimens d'étude en entrée trou du sandwich phloème (Fig. 2D). Observer des spécimens en utilisant un microscope de dissection sous une lumière rouge ou lumière blanche fixée à un niveau faible (Fig. 2E). Pour enregistrer les activités ou la croissance de spécimens dans le sandwich phloème fixer un appareil photo ou une caméra vidéo pour le microscope. Fixez caméras vidéo spéciales au microscope oculaire (Fig. 2E et F). Pour les très petits organismes tels que les acariens, les nématodes et pseudoscorpions, utiliser une caméra vidéo haute définition fixée au microscope. Pour enregistrer des sons, des microphones insérer dans le trou du sandwich phloème d'entrée ou par le côté du sandwich phloème. Parce que le trou d'entrée est petit, utiliser un petit microphone comme un microphone à condensateur électret. Pour enregistrer sur la face ou de la surface dele sandwich phloème utilise un élément piézo-électrique (Fig. 3B). Pour lire le son, utiliser le même élément piézo ou joindre un transducteur tactile (excitateur) à la surface de la partie supérieure ou inférieure de l'acrylique.