技术树内组织学习节肢动物和微生物群落

1.选择韧皮部和去除树选择具有特定特征的一棵树。收集松树韧皮部（ 即在松属树木），因为他们有一个独特的韧皮层，也就是几毫米厚。18,27一旦树位于具有数较低的树枝，检查是否有其他缺陷，如昆虫的袭击和/或病原体。另外，用韧皮部与其他针叶树如云杉树的韧皮部三明治。9其他树种，可适合韧皮部切除，如硬木。 注：针叶树大冠通常具有最厚的韧皮组织。最大化韧皮部的量，最好是切成具有在躯干（伯乐）几乎没有缺陷和分支的树。松树是自我修剪工作最好的。韧皮部通常在生长季节最厚，并且比在地面附近较厚越往上躯干。韧皮部有时难以祛瘀E从在秋季或冬季的树木。 砍一棵树下来，或者使用最近削减日志来获得韧皮组织。选择一个方向坠落，这将最大限度地减少对树木的破坏，以及附近的树木。切枝断的树干，允许在韧皮部搬迁到树皮的材料更容易获得。 一旦树被切断（砍伐;丢弃在地上）开始刮树皮关闭后备箱用锋利的刀片拉伸（ 图1A）。刮树皮的区域断，直至达到韧皮层。 注：韧皮层典型地是在颜色（ 例如，奶油色）和潮湿的打火机，而外皮是烘干机中，较暗的颜色（ 图1B）。请特别注意不要刮伤韧皮部。树皮的面积刮下取决于所需的韧皮部件（多个）的大小。 树皮被删除后，切断韧皮部片的轮廓用锋利的刀。确保刀割一路木质部（ 图2A）。 以除去韧皮部，用手指仔细剥离背面的韧皮部开始在韧皮部片的一个角。用小刀将协助刮韧皮部关木质部。继续拉动韧皮部关断，直到整片被除去。 注：典型的韧皮部剥离最简单的夏季树。对于韧皮部是非常难以去除，一铲形工具可以在努力提供帮助。 立即将韧皮部片进入无菌袋。为了达到最佳效果，真空密封袋（ 图2B），或者，如果使用保鲜袋包，从塑料袋中取出所有的空气。这增加了韧皮部的寿命。或者，把多件韧皮部的一个袋子。在密闭的塑料袋店韧皮部稍高于冰点（1〜10℃），以保持其新鲜度。 2.创建韧皮部三明治切成两个相等的部分透明的丙烯酸，聚碳酸酯或类似的硬的，透明的材料（ 例如玻璃）稍微大的r除片韧皮部的（ 图2C）。圆形的丙烯酸类的边缘，以防止角部从撕开封口膜密封。该协议使用英寸厚的透明压克力1/8。 注：该切割块的大小取决于受试生物体的需要和研究的长度。例如，一对小蠹虫的利用韧皮部的4分米2个多月的时期，但只需要1分米2，如果研究以在几天内发生。 钻一个孔的丙烯酸系片之一以允许研究有机体（多个）的条目。孔的尺寸和数量取决于目标（ 图2D）。 之前，将所述丙烯酸系片之间的韧皮部，灭菌丙烯酸系表面（具有> 70％的乙醇），或者，如果使用新的丙烯酸，除去保护膜。 把一块新鲜的韧皮部的无菌压克力片之间。东方丙烯酸系片与韧皮部的内侧或外侧的孔（多个），whichever被需要的。通常情况下，面对的韧皮部（一侧有树皮上）朝向所述入口孔的外侧。 3.密封的韧皮部三明治以创建围绕韧皮部三明治的临时密封，使用2英寸周围韧皮三明治（ 图2C）的边缘拉宽封口膜条带。另外，使用聚偏二氯乙烯保鲜膜密封的边缘。6下一步，将一个夹子上的夹层两侧挤压丙烯酸的韧皮部。确保整个表面被夹紧，以防止丙烯酸类和韧皮部（ 图2C）之间的空气空间。如果没有正确夹紧，标本可能丙烯酸和韧皮部之间移动。 创建一个半永久密封添加非胶合的环氧树脂或凡士林周围的韧皮部。确保该材料完全包围韧皮部。接下来，用夹子或螺钉与螺栓（可能需要钻孔的时间提前）举行的丙烯酸紧张的韧皮部。三明治只有保持活力长达一两个月。 根据研究生物的氧需求，在三明治中的一个或多个侧面添加的空气过滤器。这将允许空气进入韧皮部三明治但限制从韧皮部失水。我们使用简单的木炭过滤器，也减少真菌和细菌污染的风险。 对于需要进入和退出的意愿研究标本，更换丙烯酸片用木材或类似材料的昆虫能够钻入之一。这是用于观察木蛀虫，特别重要的，因为后幼虫状态在韧皮层完成时，他们然后钻入木质部。 为了防止测试对象从离开所述入口孔，将小培养皿（或其它的目的，磁带）上的孔中，堵逸出。因为驻留在这些空间中的生物体是使习惯到低亮度水平，则可能有必要将三明治在黑暗的房间或盒，或代替邻在上面Paque上料挡住光线。 4.观察生物体在韧皮部三明治引入研究标本进入韧皮部三明治（ 图2D）的进入口。使用下一个红光或白光设定设定在一个低水平（ 图2E）解剖显微镜观察标本。 至韧皮部夹层内记录样本的活动或生长附加的照相机或摄像机的显微镜。附上特殊摄像机到显微镜目镜（ 图2E和F）。对于非常小的生物，如螨类，线虫和​​pseudoscorpions，使用附连到显微镜的高清晰度视频摄像机。 录制的声音，插入麦克风入韧皮部三明治的入口孔或通过韧皮部夹层的侧面。因为进入孔是小的，用一个小的麦克风等的驻极体电容传声器。 从侧面或表面记录韧皮部三明治使用的压电元件（ 图3B）。要回放的声音，使用相同的压电元件或附加一个触觉传感器（励磁），以丙烯酸类的顶部或底部的表面上。