Valutazione della Sensorimotor funzione in modelli murini di malattia di Parkinson

In modo ottimale i topi dovrebbero essere testati nel corso del loro ciclo attivo (scuro). I topi nel nostro laboratorio sono mantenuti su un ciclo luce / buio inversa che ci permette di testare comodamente i topi durante il loro periodo di attività (e la nostra). Test non viene avviato finché almeno un'ora nel ciclo buio. Tuttavia, non è sempre possibile per un investigatore di mantenere una camera separata topo con un ciclo luce retromarcia. In tal caso, tutte tre prove possono essere eseguite durante il ciclo di luce ma di tenere presente che il tempo di attraversare sulla trave, numero di passi e posteriori nel cilindro, e il contatto e tempi di rimozione può essere più lungo quando testati in questo periodo. Tutte e tre le prove descritte di seguito possono essere eseguite da uno sperimentatore, ma per coloro che non sono così esperto di movimentazione e di lavoro con i topi o hanno poca o nessuna esperienza di comportamenti di misura nei topi quindi potrebbero essere necessari uno sperimentatore aggiuntivo. In questo caso la seconda sperimentatore può aiutare conil test beam impegnativo mettendo i topi sulla trave mentre l'altro sperimentatore registra la prova o nel test di rimozione adesivo il secondo sperimentatore può funzionare il timer, mentre gli altri posti l'adesivo sul muso e mette il topo nella gabbia. 1. Sfidare Fascio Traversal Procedura Inverti 3 gabbie pulite del mouse su un tavolo o in una stazione di gabbia evoluzione del mouse. Allineare le gabbie in modo uniforme in modo che possano supportare la lunghezza della trave (1 metro). Montare le quattro sezioni della trave dal più ampio al più stretto sezione e posto sulla parte superiore delle gabbie invertiti del mouse. Collocare il homecage dei topi che si prevede di testare su un fianco e alla fine della trave in modo che l'estremità più stretta della trave porta destra nella homecage. Raccogliete il primo mouse con la base della coda e sostenere i suoi arti posteriori con il palmo della mano. Posizionare il mouse alla larga del fascio e lasciare andare la coda e rimuovere il vostro hand. Lasciate il mouse annusare e muoversi al fine di diventare migliore orientato all'apparato-se il mouse si gira redirect delicatamente nella direzione desiderata. Sollevare la homecage (anche se ha cagemates in esso) mantenendolo nella stessa posizione su un lato e avvicinarla al mouse test. Come il mouse test inizia a cercare di entrare nel homecage spostarlo indietro in modo che il mouse non entra, ma fa un passo in avanti. Continuare a fare questo fino in fondo la trave. Al termine permettono il mouse per entrare nel homecage. Fare la stessa procedura per ogni topo nella gabbia. Questa è la prima prova "assistito". La trave deve essere pulita a fondo tra gabbie con un disinfettante fornito dalla cura degli animali o il personale veterinario. All'interno di una gabbia, è importante eliminare ogni urina o pellet fecali largo della trave prima dell'esecuzione del prossimo topo, perché questo sarà distrarre il prossimo mouse. Una volta che tutti i topi in gabbia sono passati attraverso un processo assistito poiprendere il primo mouse di nuovo e metterlo al largo estremità della trave. Se necessario, con la mano delicatamente orientare il mouse nella direzione desiderata e toccare leggermente la parte posteriore di spronarlo a muoversi lungo la lunghezza della trave nel suo homecage. Se il mouse si ferma ad annusare o camminare fuori il raggio Correggere il mouse con la mano o raccoglierlo e metterlo nella stessa sezione in cui si allontanò. Avere la mano vicino per guidare il mouse alla fine della trave. Si vuole cercare di ridurre al minimo il mouse fermarsi ed esplorare mentre sulla trave. Più questo viene fatto durante la formazione del meno il mouse tende a farlo durante il test. Il processo termina quando il mouse si posiziona uno dei suoi arti anteriori nel homecage. Il prossimo mouse può quindi ricevere la sua prova 2 °. Topi ricevono un totale di 5 prove il primo giorno di formazione, alternando i topi in modo che ciascun topo ha un intervallo tra le prove di ~ 30 sec. Tipicamente dalle ultime prove pochi topi attraverserà la lunghezza dellafascio, da soli, senza bisogno di correggere. 24 ore più tardi il giorno 2 di formazione può iniziare. Il giorno 2 i topi ricevono più di 5 studi sullo stesso fascio di set-up come nel giorno 1. I topi non necessitasse di assistenza, ma possono avere bisogno di essere corretto o toccato sul retro per evitare l'arresto o esplorare. 24 ore dopo la giornata di test può iniziare. Per il giorno del test, il fascio viene impostato in modo simile ai precedenti 2 giorni di formazione. Tuttavia, ora una griglia maglia che corrisponde a ciascun fascio è posto sulla parte superiore di ciascuna sezione della trave. Una videocamera viene utilizzato per registrare tutte le prove trave traversale e può essere effettuata da uno o più sperimentatori. Etichettare una scheda con le informazioni essenziali esperimento (data, mouse #, prova #, ecc). Posizionare questa carta di fronte alla telecamera e registrare per 2-3 secondi in modo che sia chiaro che il mouse è in fase di test e che cosa prova è su. Il mouse viene posizionato sopra la superficie della griglia sulla sezione più larga del fascio e registrato uns si muove lungo la trave. La registrazione deve essere abbastanza vicino in modo che l'intera lunghezza del corpo del mouse è visibile sulla telecamera. Se è troppo poi scivola sono difficili da vedere e se è troppo vicino quindi movimenti degli arti possono essere mancati. La telecamera deve essere posizionato in modo che la griglia è nel mezzo del visualizzatore. Il giorno di test tutti i topi ricevono 5 studi sulla trave griglia con superficie. 2. Analisi di video Fascio I video possono essere visualizzati direttamente dalla fotocamera o collegati a un televisore o un computer per una visione a schermo più grande. Videocassette dovrebbero essere segnati da uno sperimentatore cieco al genotipo e condizione di trattamento all'interno dell'esperimento. Errori per ogni prova sono segnati come il video viene riprodotto al rallentatore. Scivola o errori vengono conteggiati quando il mouse si trova ad affrontare e andare avanti. Una scivolata attraverso o al di fuori della griglia viene considerato un errore quando l'arto scivola oltre 0,5 centimetri sotto la superficie della griglia (a metà). Eventuali slittamentifatta dopo un mouse si ferma o orienta la sua testa di lato non sono considerati errori. Se il mouse non si muove in avanti e di un arto o gli arti ripetutamente scivola attraverso la griglia non è considerato un errore. Sulla parte sottile del fascio base delle zampe posteriori può essere in cima della griglia e le dita appesa fuori il lato, questo non è considerato un errore. I passi sono contate anche al rallentatore. L'arti posteriori di fronte alla telecamera viene utilizzato per tenere traccia del numero di passi. Il conteggio inizia quando il mouse fa il suo primo passo in avanti e si conclude quando il mouse si posiziona la sua zampa anteriore nella homecage. Tempo di attraversare viene valutato con un cronometro e viene fatto in tempo reale. Il temporizzatore viene avviato quando il mouse comincia a muoversi avanti e termina quando il primo zampa anteriore viene inserito nella homecage. 3. Attività spontanea nella Procedura Cilindro Inverti 3 gabbie pulite del mouse su un tavolo o in una stazione di gabbia evoluzione del mouse. Disporre due gabbie accanto a Postaach altro ~ 18 cm l'uno dall'altro in modo che la parte anteriore delle gabbie si trovano ad affrontare lo sperimentatore. Il restante gabbia viene posizionato dietro le altre due gabbie e servirà a sostenere lo specchio. Posizionare il pezzo di vetro sopra le due gabbie e posizionarlo in modo il vetro viene sostenuto dal bordo esterno dei primi 2 gabbie. Collocare il cilindro sulla parte superiore del vetro e lo specchio con un angolo sotto il vetro, appoggiato al 3 ° gabbia in indietro. L'angolo può variare da 30 ° – 45 °, ma soprattutto la vista dallo specchio deve includere l'intero diametro del cilindro. Impostare la videocamera di fronte allo specchio e regolare sia lo specchio e videocamera finché è possibile visualizzare l'intero diametro del fondo del cilindro. Impostare il timer per 3 minuti ed etichettare una scheda con i dettagli importanti esperimento (data, mouse #, ecc.) VideoRecord l'etichetta per 2-3 sec. Posizionare il mouse nel record cilindro e stampa e il timer. Record il mouse per tre minuti. E 'importante che l'area di prova è tranquilla come rumori forti e la conversazione può distrarre il mouse e potenzialmente causare un comportamento congelamento. Durante il 3 min utilizzare una mano contatore per contare il numero delle parti posteriori del topo rende mentre nel cilindro. Un posteriore è definito come un movimento verticale sia con arti anteriori dal pavimento in modo che il mouse è in piedi solo sui suoi arti posteriori. Alla fine del 3 min togliere il mouse e metterlo di nuovo nella sua homecage. Pulire il cilindro e vetro con un disinfettante fornito dalla cura animale o personale veterinario. Lasciare che la soluzione di pulizia asciugare prima di inserire il successivo topo nel cilindro. 4. Analisi delle attività spontanea I video possono essere visualizzati direttamente dalla fotocamera o collegati a un televisore o un computer per una visione a schermo più grande. Le videocassette devono essere segnati da uno sperimentatore cieco al genotipo e condizione di trattamento all'interno dell'esperimento. Passi zampa anteriore sono contati come il video viene riprodotto al rallentatore. Un passo zampa anteriore viene conteggiato quando un animale si muove sia arti anteriori in sequenza lungo il pavimento del cilindro con un movimento consecutivo. Un movimento forelimb non viene conteggiato se il tempo tra il movimento di una zampa anteriore e l'altra zampa anteriore è più lungo di 5 sec. Passaggi degli arti posteriori sono conteggiati nello stesso modo come passi forelimb. Il tempo trascorso grooming viene misurato con un cronometro e la riproduzione del video in tempo reale. Attacchi Grooming sul muso, vibrisse, e il corpo sono misurati. 5. Rimozione adesivo Posizionare il mouse nella sua homecage in sala prove o in una stazione di gabbia evoluzione del mouse. Rimuovere il contenitore alimentatore dalla gabbia e sostituire il coperchio della gabbia. Lasciare i topi / mouse per abituare alla sala prove e la gabbia senza l'alimentatore per 1 ora. Per testare utilizzare una gabbia pulita per posizionare cagemates modo il mouse test è l'unico in homecage.Rimuovere ~ 3/4 della biancheria da letto e metterlo nella gabbia pulita con i cagemates. Nel collottola homecage il mouse prova al fine di trattenere e con un paio di piccole luogo un'etichetta adesiva forcipe sul muso del topo. Premere delicatamente l'etichetta sul muso con la pinza e rilasciare il mouse. Mettere il coperchio sulla gabbia e avviare un cronometro. Quando il mouse fa un tentativo di rimuovere l'etichetta con le zampe anteriori registrano il tempo. Se il mouse entra in contatto, ma non rimuove l'etichetta poi tenere il timer in corso fino a quando non lo rimuove e registrare quel tempo così (contatto e tempo di rimozione). Se il mouse non viene a contatto o rimuovere l'adesivo entro 60 sec poi il processo è terminato e l'adesivo viene rimosso manualmente dallo sperimentatore. Posizionare il mouse prova nella gabbia pulita e rimuovere la prossima mouse e posizionarlo nella homecage e iniziare la prova. Tutti i topi ricevono 3 prove. E 'importante alternare i topi invece di fare tutte e tre le prove inun topo in una sola volta. Processi in cui l'etichetta cade spento o non è sicuro sul muso non sono conteggiati.