초파리 성인 후각 충격 학습

1 비행 준비 유전 적 배경 (26)에 대한 제어하기 위해 행동 실험을하기 전에 적어도 6 세대, 모든 돌연변이, GAL4 / UAS 및 CSw- 같은 야생형 균주와 다른 라인을 교배. 특정 조작이 다른 온도를 필요로하지 않는 25 ° C에서 12시 12분 시간의 명암주기에 따라 표준 옥수수 가루, 효모 및 당밀 음식 다이어트에 파리를 성장. 형질 전환 유전자 발현의 효과를 확인하려면 : 사용 18 °를 C는 개발을 통해 GAL4 Gal80 TS (TARGET 시스템)의 도입 유전자의 발현을 방지하고 1~2일 행동 실험 전에 30 ° C 배양기에 파리를 이동합니다. 형질 전환 유전자 발현 3,4,6,7,14의 효과를 결정하기 위해 30 ° C에서 실험을 실시한다. 신경을 자극하는 열 활성화 TRPA1 채널을 사용하여 실험 : 알려진 온도 인 23 ° C,에서 파리를 올립니다비활성 채널을 유지하고 신경을 표현하는 TRPA1을 활성화하기 위해 30 ° C에서 동작 방으로 이동합니다. 시냅스 출력 11, 14, 24을 차단하는 중요한 Shibire 온도를 사용하여 실험의 경우 : 후면 18 ° C에서 파리와 30 ° C에서 테스트를 실시하고 있습니다. 실험 전에 파리 1-2 일 수집과 빛 CO 2 마취하에 약 25의 그룹으로 계산한다. 12시 12분 시간 광 환경 제어 방에 70 %의 상대 습도 (특정 조작이 다른 온도를 요구하지 않는 한), 25 ° C에서 파​​리 식품 유리 병에서 O / N을 적어도 (효모없이)를 저장 : 어두운 상황을 때까지 실험. 참고 :이 스토리지 파리는 초파리 학습을위한 최적의 조건을 가지고 환경 제어 방에서 수행 된 이후의 학습 테스트에 순응 할 수 있도록하는 것은하고, 중요한 것은, 어떤 일 ENVI를 제거행동 표현형에 영향을 미칠 수있는 환경적인 변화. 실험 전에 2 준비 주문 제작 방풍 T-미로 실험 (그림 1)을 수행합니다. 정기적으로 밀폐 씰은 실험 기간 동안 얻을 수 있도록 피팅 튜브를 확인합니다. 필요한 경우, T-미로 내부를 구획 밀봉 O-링을 변경. 교육 튜브 내부에 맞춤 구리 그리드를 배치합니다. 확인하고 정기적으로 이러한 그리드를 청소하고, 산화 된 경우 교체합니다. 전기 자극기에 연결된 스위치 박스에 실행 악어 클립을 통해 와이어에 구리 그리드를 연결합니다. 장치는 필요한 충격을 전달 될 수 있도록 전압계를 사용합니다. 어떤 공기 누출을 방지하기 위해 긴밀하게 미로를 보유하는 g-클램프를 사용합니다. 공기 펌프로 실행 튜브에 T-미로를 연결, 허용하는 냄새는 파리에서 그려지고 이후 T-미로에서 제거합니다. 온화한 공기를 유지~ 2 L / min으로 흐름 3 냄새 희석 파리가 모두 냄새에 대한 동일한 선호를 표시하도록 농도에서 두 개의 서로 다른 냄새를 사용합니다. 미네랄 오일 7,13에 희석 : 4 – 메틸 시클로 헥산 (1:67) 3 옥탄 올을 (100 일)를 사용합니다. 참고 : 조심스럽게 실험실에 따라 다를 수 이러한 농도를 결정합니다. 예를 들어 다른 사람은 모두 냄새 24 1:10을 사용합니다. 일반적으로 사용되는 다른 냄새 에틸 아세테이트 및 이소 아밀 아세테이트를 포함한다. 피펫 따라서 냄새의 깃털로 파리를 노출, 공기가 컵에 냄새에 그려 질 수있는 구멍이 상단이 플라스틱 튜브에 의해 덮여 냄새 블록에 배치 맞춤 냄새 컵에 희석 냄새의 30 μL. (4) 교육 프로토콜 (그림 1과 2) 성인 후각 충격 조화를 들어, 희미한 붉은 빛 아래의 모든 실험 (예., 빨간색 LED), 연구자가 볼 수 있도록 수행하지만 플로리다 방지이와 같이 입력 영상과 반대로 파리 후각에 집중할 수 보는 Y. 교육 튜브에 파리를 소개하고 T-미로에 부착하고 90 초 동안 튜브와 공기 흐름에 적응 할 수 있습니다. 60 초간의 전체 지속 기간 동안 (3.75 초 펄스 간 간격과 열두 1.25 초 펄스들로 이루어진) 60 V의 충격으로 제 냄새 (4-메틸 시클로 헥산, MCH)을 제시한다. 냄새 나 충격없이 30 초 휴식 기간이 충격을 따르십시오. 충격없이 60 초 동안 초 냄새 (3 – 옥탄 올, OCT를) 현. 냄새 나 충격없이 30 초 휴식 기간이 충격을 따르십시오. 이러한 낡은 마우스 매트 부드러운 표면에 T-미로의 바닥을 두드리는 부드럽게 옆으로 T-미로를 켜서 T-미로의 중앙 챔버로 교육 실에서 파리로 이동합니다. 90 초 동안 중앙 챔버에서 파리를 유지한다. 보로 선택 튜브를 장착장치의 ttom는 T-미로를 형성한다. 학습을 측정 그들은 동시에 냄새에 노출 된 T-미로의 선택 지점에 파리를 이동 한 방향으로 이동합니다. 120 초 동안 시험 기간을 수행. 트랩하여 최대 중앙 챔버를 슬라이딩 선택 튜브의 끝을 차단하여 선택 튜브의 파리. T-미로의 각 팔에 음식 튜브 및 횟수에 중앙 구획에 파리를 수집합니다. 메모리를 측정 교육 (4.6) 후 파리를 수집하고 누룩을 넣지 않은 식품 유리 병에 T-미로로 전송합니다. 저장소 (소개 참조) 관심 메모리 위상을 결정하기 위해 필요한 남은 시간 동안 25 ° C에서 어두운 70 % 습도에서 파리. 단계 4.7에서와 같이 T-미로 파리를 재 도입. 장기 기억은, 파리의 여러 배치가 동시에 훈련 할 수있는 사용자 지정 내장 된 미로를 사용합니다. 15 분 간주기 간격 (스파와 교육의 5주기를 관리CED) 또는 간주기 간격없이 (밀집). 시험 때까지 어둠 속에서 18 ° C에서 파​​리와 70 %의 습도를 유지한다. 테스트에 앞서, 25 ° C로 파리를 이동하고 적어도 1 시간 동안 순응 할 수 있습니다. 장기 기억에게 훈련 후 24 시간을 평가합니다. 행동 실험 후, 뜨거운 물, 무취의 세제 냄새 컵을 청소합니다. 10 μL의 sigmacote으로 건조 후, 코트 컵. 전자 레인지에 의한 가열 건조를 sigmacote. 때때로 뜨거운 물, 무취의 세제 방풍 튜브 및 악취 차단 T-미로를 청소합니다. 성과 지표의 5 계산 : 파리 '메모리의 측정 마이너스 파리 (CS의 총 개수로 나눈 충격 페어링 냄새 (CS +)를 선택하는 파리의 수 – 충격 페어링 냄새 (CS)을 피하는 파리의 수와 같은 각각의 조건에 대한 성능 지수 (PI)를 계산 – + CS +) 1. PErformance 지수 (PI) = (# CS는 – 파리 – # CS +가 파리) / (# 총 파리) MCH는 충격 페어링 냄새 및 OCT를 충격 페어링 냄새시킨 하나시킨 실험의 PI를 평균화함으로써 실험의 최종 PI를 계산한다. 이것은 하나의 냄새에 대한 높은 선호도를 갖는 파리의 편견을 제거합니다. 6 감각 운동 제어 T-미로 6,7,17로 ~ 40-50 파리를 도입하여 악취 시력을 수행합니다. 90 초 후, 선택 포인트로 파리를 이동하고 순수한 냄새와 공기 사이에서 선택을 그들에게 두 분을 할 수 있습니다. 수집하고 파리를 계산합니다. 테스트에 참여하는 사람들에 의해 악취를 선택 파리의 총 수를 나눔으로써 회피 백분율을 계산한다. 충격 반응성 6,7,17 ​​들어 충격 챔버에 파리를 소개한다. 나머지의 90 초 후, 파리 유사한 탈출 할 수있는 60-V D​​C 감전, 관리충격이없는 튜브. 파리가 선택할 수있는 두 분을 허용; 수집하고 파리를 계산합니다. 실험에서 파리의 전체 숫자로의 충격 관을 탈출하여 충격을 피할 파리의 개수를 나눔으로써 충격 회피 백분율을 계산한다. 전기 충격을 탈출 자들의 총에 중앙 챔버에 남아 파리를 포함합니다.