에 대한 Multibarrel 전극을 제조 및 꽃돼지 - 다시 사용<em> 생체에</em신경 응답> 약리 노는

유리 전극을 당겨 유리 전극을 당겨 싱글 배럴 전극을 당겨. 필라멘트와 모세관 싱글 배럴 유리를 사용하여 측정 한 1-2에 대한 마이크로 미터, 10-12mm의 샤프트 길이, 12 MOhm의 상응하는 전극 저항 (범위 5-20 MOhms을)의 직경 팁을 당겨 0.9 % NaCl 용액 인치 낮은 전극 저항은 더 많은 배경 활동의 결과 및 개별 뉴런에서 단일 활동을 분리에 따라서 더 많은 어려움을 것입니다. 이 전극을 당기는를 들어, 가열 필라멘트 또는 가열 코일 하나를 수평 또는 수직으로 끌어 당기는 중 하나를 사용합니다. multibarrel 전극을 당겨. multibarrel 유리의 훨씬 더 큰 직경 및 전체 multibarrel 주변에도 열 분포의 필요로 인해, 큰 직경의 가열 코일이 아닌 가열 필라멘트와 강력한 끌어 당기는이 필요합니다. multibarrel의 피펫은 N으로 가열 필라멘트의 중앙에 삽입 할 수 있습니다O는 가열 코일에 문의하십시오. 외에 5 통 피펫은 여기에 설명합니다, 3 통이나 7 통 피펫은 상업적으로 이용 가능한 대체합니다. 약 10 마이크로 미터 총 직경 이하의 피펫 팁에 유리를 당겨. 팁은 다음 단계에서 올바른 직경 분류되므로 정확한 팁 크기는 긴 상대적으로 얇은해야 전극 팁의 전체 모양,보다 당기는 과정에서 더 중요합니다. 원하는 전극 팁의 형상에 대한 그림 1C에있는 이미지를 참조하십시오. 매우 긴 얇은 전극 모양 (그림 1A)를 구부리하고 따라서 어려운 해결하기 위해 전극 팁을 아프게 할 수있을 것입니다 동안 짧고 뭉툭한 전극 모양 (그림 1B)는 뇌에 진출 조직 손상의 상당한 양을하게됩니다 직경 (2 단계 참조). 전극 팁을 수정 전극 팁을 수정합니다. 두 전극이 함께 접착 할 수 있습니다 전에그들은 수정해야합니다. 단일 전극의 샤프트 그것이 완성 된 돼지 – 다시 전극의 결합 샤프트가 가능한 얇은 있는지 확인 할 수있는 multibarrel에 부착하기 전에 구부러해야합니다. 또한, multibarrel 전극의 끝은 iontophoresis에 대한 낮은 저항을 보장하기 위해 부러해야합니다. 약 20도하여 단일 배럴 전극의 샤프트를 굽히세요. 가능한 가장 작은 분젠 버너 불꽃을 사용합니다. 표준 실험실 공급 업체의 일반적인 '작은'분젠 버너는이 응용 프로그램에 대한 너무 큰 불꽃 크기를 만들 수 있습니다. 이 문제가 가장 작은 상업 분젠 버너를 사용하여 버너의 상단에 주사기 바늘 (~ 18 게이지)을 확보하고, 치과 시멘트를 사용하여 연결을 밀봉 회피합니다. 운영 할 때, 불꽃은 직경 5mm 이하에 대해, 그리고 높이 8mm에 대해 참조하기 어려울 수 있습니다. 방에 공기의 움직임이 불꽃을 꺼 뜨려 버리 려구요 것 때문에에 버너를 작동하는 것이 좋습니다닫힌 방, 또는 바람 방패를 사용합니다. 약 20도하여 올려야 불꽃을 통해 하나의 배럴 전극을 이동합니다. 버너 불꽃이 떨어져 전극 팁에서 약 10mm의 전환 영역에서 유리를 용해가하는 것을 목표로하고 있습니다. 끝이 아래로 가리키고, 우리는 전극이 약 45도에서 개최 할 것을 제안 전극의 끝을 용해 방지하고, 상대적으로 신속하게 불을 통해 전극을 이동합니다. multibarrel 전극의 끝을 중지. 전극 팁을 위반하면, 최소 10 배 객관적이고 10 배 oculars와 함께 현미경을 사용하는 동안 시각적 제어를 보장합니다. 안구에 삽입 측정 규모도 팁 크기를 측정하기 위해 필요한 것입니다. 플렉시 글라스의 끝은 현미경의 시야의 절반에 하나의 3 분에서 볼 수 있도록 현미경을 플렉시 글라스의 조각을 연결합니다. 우리의 경우, 플렉시 글라스의 작품은 맞춤으로 확보 할 수있는 나사를 통해 25 X 70mm와 두께 첨부 5mm에 관한현미경 단계에 스레드를했다. 그것은 플렉시 글라스는 독립적으로 슬라이드의 이동을 허용하는 디자인을 가지고하는 것이 중요합니다. 유리 슬라이드에 대한 모델링 점토의 침대에서 multibarrel 전극을 배치하고, 현미경 단계의 슬라이드 홀더에 전극을 포함하는 슬라이드를 삽입합니다. 현미경 단계의 XY의 manipulators 사용하여 부드럽게 플렉시 글라스의 작품에 대한 전극 팁을 이동하고, 현미경 oculars을 통해 팁의 파괴를 관찰합니다. 완전히 약 25-35 마이크로 미터의 누적 직경 multibarrel의 팁을 깰을 시도합니다. 고르지 휴식과 너무 크거나 팁을 끊었 팁 직경과 피펫을 폐기하십시오. 우리는 바람직하지 않은 팁 모양으로 인해 우리 multibarrel 전극의 약 30 %를 폐기하십시오. 꽃돼지 – 다시 전극을 조립 돼지 – 다시 전극을 조립. 위치 전극. 현미경 단계에서 단계 2.2에서 사용 플렉시 글라스 조각을 제거합니다. 완료 확보유리 슬라이드에 대한 모델링 점토로 multibarrel 전극은 약간 위쪽으로 지적 팁. 위로 가리키면 단계 3.2, 두 전극의 접착하는 것이 중요합니다. 최대 가리 팁 접착제는 접착 전극 팁을 피 끝에서 도망 거든. 맞춤 제작 micromanipulator (그림 2)의 전극 홀더에 구부러진 단일 배럴 전극을 삽입합니다. 먼저하고 미세한지도를 시각적지도를 사용하여 multibarrel 전극에 단일 배럴 전극을 낮 춥니 다. 단일 전극는 약 5-10 마이크로 미터로 multibarrel 팁의 끝을 돌출의 팁과 5 통의 배열에 의해 형성되어있는 홈에 직접 낮아해야합니다. 단일 통을 낮추면 때, 밀접하게 두 전극 사이에 형성되어있는 각도를 관찰합니다. 최고의 결과는 팁이 서로 떨어져 가리 아니라에 단일 전극을 낮출 시도 중 어느 한 각도를 피하기 위해 여러 완벽하게 병렬 또는 그 팁이있는아주 약간의 '쐐기'배열을 형성 먼저 multibarrel을 건드렸다. 단일 배럴 끝이 매우 유연하기 때문에, 그것은 년에 지어진 스프링 작업의 작은 금액을 가지고 깨끗한 합성 팁을 형성 끝이 여러 통 전극의 상단 표면에 도달 한 후 하나의 전극이 조금 더 낮아 될 때 휘어 질까 함께 팁을 들고 도와주는. 싱글 배럴과 multibarrel 전극 사이의 각도가 (쐐기 너무 많이)이 너무 가파른 경우 그러나, 스프링 작업이 너무 높이이어야하며 전극 배열 하방으로 구부리합니다. 함께 접착제 전극 샤프트. 접착제 함께 두 전극의 샤프트를 사용 시아 노 아세틸렌 (superglue). 접착제 드롭을 시청할 수있는 평면 이쑤시개와 터치 전극 어셈블리의 작은쪽으로 접착제의 작은 방울을 배치합니다. 팁 대부분의 말초 위치에 시작하고 천천히 전극 팁에 대한 전극 샤프트를 따라 접착제 드롭과 이쑤시개로 이동합니다. 너무 많은 접착제를 사용하거나, 접착제 t을 적용전극 팁 OO이 근처 적어도 부분적으로 nonfunctional 전극을 렌더링, 접착 전극 구멍을하게됩니다. 치과 시멘트와 공동 안정화. 작은 일회용 플라스틱 접시에 치과 시멘트 및 치과 아크릴의 작은 금액을 혼합하거나 평면 이쑤시개를 사용하여 보트를 무게. 시멘트는 moldable 될 때까지 기다리 및 공동 (그림 3의 핑크색 자료)를 안정화하기 위해 두 전극 사이의 공동에 작은 금액을 적용합니다. 15 분 건조 할 수 있습니다. 전극을 제거하고 저장합니다. 조심스럽게 micromanipulator 홀더에서 먼저 완성 된 돼지 – 다시 전극을 제거한 다음 유리 슬라이드에서 분리하고, 방진 용기에 저장. 전극 채우기 솔루션을 준비 전극 채우기 솔루션을 준비합니다. iontophoresis 청구 분자를 요구하기 때문에, 대부분의 요원이 산성 또는 알칼리성 환경 (일반적으로에서 또는 해산해야각각 따 약 3-4의 산도, 또는 8-10에 대한의 산도). 자주 iontophoresis에 사용되는 화학 물질의 수는 표 1에 나열되어 있습니다. 표에 나열되지 않은 에이전트를 들어,이 분자가 부과 유지 산성 또는 알칼리성 환경에서 분자를 사용하여 쉽게되고, 그에 따라 녹아 버릴 것 여부, pKa ​​값에서 결정합니다. 최상의 결과를 얻으려면 매일 모든 솔루션은 신선한 섞는다. 입력하고 전극을 준비 입력하고 전극을 준비합니다. 주사기 필터 주사기에 부착 된 34 게이지 바늘 – 그냥 전극을 사용하기 전에, 탄소 섬유 28를 사용하여, 그 각각의 약물이 각 배럴을 돌려 입력합니다. 선택의 마약, 그리고 균형을 통 등 3M NaCl과 중앙 통에 5 통 구성의 4 바깥 통을 채 웁니다. 뿐만 아니라 3M NaCl로 하나의 배럴 기록 전극을 입력합니다. 이러한 빠른 녹색 또는 페놀 빨간색으로 NaCl 용액에 염료를 추가하면 쉽게 전극 팁을 볼 수 있도록합니다뇌 표면에 전극의 배치시. 녹화 설정의 전극 홀더에 전극을 삽입하고 적절한 유리 통에 모든 전선을 삽입합니다. 단열재의 약 1cm가 끝에서 제거 된있는 절연은 전선을 사용하십시오. multibarrel 전극 (4 마약을 통 한 균형 배럴), 플러스 녹화 한 통 전극에 삽입해야하는 앰프 와이어 5 전선이 있어야합니다. Iontophoresis 펌프 모듈을 켜십시오 iontophoresis 펌프 모듈의 전원을 켜고 모든 통을 테스트합니다. 각 펌프 모듈의 전극 테스트 기능은 전극 통이 작동하는 경우 결정하는 데 도움이됩니다. 사용하지 않을 분자 요금으로 반대 극성의 유지 전압이 적용해야 할 경우 통에서 약물의 누출을 방지 할 수 있습니다.