用ピギーバックMultibarrel電極の製造と使用<emインビボ></em神経反応の>薬理マニピュレーション

ガラス電極を引くガラス電極を引く シングルバレル電極を引き出します。フィラメントとキャピラリーシングルバレルガラスを使用して測定されるように約1〜2メートル、10〜12 mmのシャフトの長さ、約12 Mohmを（範囲5月20日Mオーム）の対応する電極抵抗の直径に先端を引っ張る0.9％NaCl溶液インチ下部電極抵抗はもっと背景活動になると個々のニューロンから単一の活動を単離するため、より困難になります。この電極を引っ張るため、加熱フィラメントまたは加熱コイルのいずれかで水平または垂直プラーのいずれかを使用します。 multibarrel電極を引き出します。multibarrelガラスのはるかに大きな直径と全体multibarrel周りに均等な熱分布の必要性のために、より大きな直径の加熱コイルではなく、加熱フィラメントとの強力な引き手が必要とされている。 multibarrelピペットはnで加熱フィラメントの中心に挿入しなければならないoは、加熱コイルにご連絡ください。ほかに5バレルピペットは、ここで説明することに注意し、3バレルまたは7バレルピペットは、市販の選択肢です。約10マイクロメートル径の合計、以下のピペットの先端にガラスを引き出します。先端が次のステップで正しい直径に壊れていますので、正確なサイズのチップは長く、比較的薄くすべきである電極先端の全体の形状、より引き上げ工程中にそれほど重要ではありません。所望の電極先端形状については、 図1Cに画像を参照してください。非常に長くて細い電極形状（ 図1A）が曲がってしまい、したがって、それは難しい正しいに電極チップを壊すことになりますが、短いと太くて短い電極形状（ 図1B）は 、脳内に進め、組織の損傷のかなりの量が発生します直径（ステップ2を参照）。 電極チップを修正電極チップを変更します。 2つの電極が一緒に接着する前に、、彼らが変更されなければならない。単一電極のシャフトは、それが完成したピギーバック電極の複合シャフトはできるだけ薄くあることを確認するためにmultibarrelに取り付けることができる前に曲げることが必要です。さらに、multibarrel電極の先端はイオントフォレーシス用低抵抗を確保するために破談にする必要があります。 約20度で、シングルバレル電極のシャフトを曲げてください。可能な限り最小のブンゼンバーナーの炎を使用してください。標準ラボ供給会社からの典型的な "小さな"ブンゼンバーナーは、このアプリケーションのためにはるかに大きすぎる炎のサイズを作成します。この問題を回避するには、最小の商業ブンゼンバーナーを使用して、バーナーの上部に注射針を（〜18ゲージ）を確保し、歯科用セメントを使用して接続をシールします。動作させた場合、火炎は、直径が5mm以下程度であり、背の高い約8mm、参照してくださいすることは困難である必要があります。部屋の中の空気の動きはその炎を消すので、それは内にバーナーを操作することをお勧めします密閉された部屋や、風の盾を使用する。約20度でそれを曲げるために炎を介して単一のバレルの電極を移動します。バーナーの炎が離れて電極先端から約10ミリメートルでの遷移領域でガラスを溶融することを目指している。先端が下向き、我々は電極が約45度で開催されることを示唆している電極の先端を溶融回避し、比較的早く炎を介して電極を移動します。 multibarrel電極の先端を折ります。電極先端を破壊しながら視覚的なコントロール性を確保するために、最小の10倍の対物レンズと10倍の接眼レンズと顕微鏡を使用しています。眼球に挿入さ測定スケールもチップサイズを測定するために必要とされる。プレキシガラスの端が顕微鏡の視野の半分に約3分の1に見られるような顕微鏡にプレキシガラスの部分を取り付けます。我々のケースでは、プレキシガラス片は25×70 mm、厚さとカ​​スタムに確保できるねじを介して接続されている約5mmである顕微鏡ステージでスレッドを作った。それは、プレキシガラスは独立スライドの移動を可能にする設計を持つことが重要です。スライドガラス上の粘土の床でmultibarrel電極を置き、顕微鏡ステージのスライドホルダーに電極を含むスライドを挿入します。顕微鏡ステージのXYマニピュレータを使用して、静かにプレキシガラスピースに対する電極チップを移動させ、顕微鏡の接眼レンズを通して先端の破壊を観察します。きれいに約25から35マイクロメートルの累積径にmultibarrelの先端を破るしようとします。でこぼこの休憩では大きすぎる、またはヒントを絶った先端径のピペットを破棄します。我々は、望ましくない先端形状に起因する当社multibarrel電極の約30％を捨ててください。 ピギーバック電極を組み立てるピギーバック電極を組み立てます。 位置電極は。顕微鏡ステージからステップ2.2で使用プレキシガラスピースを削除します。完了確保スライドガラス上に粘土にmultibarrel電極、若干上向きの先端。上向き、ステップ3.2、2つの電極の接着のために重要であろう。上向きのヒントは接着剤が接着電極チップを避けて、先端から離れて実行させる。カスタムメイドのマイクロマニピュレータ（ 図2）の電極ホルダに曲がったシングルバレル電極を挿入します。 multibarrel電極の上にシングルバレル電極を下げ、まず視覚的なガイダンスを使用して、次に顕微鏡指導。単一電極は約5〜10マイクロメートルでmultibarrelチップの先端を突き出し、その先端で、5バレルの配置によって形成された溝に直接引き下げるべきである。シングルバレルを下げる際に、密接に二つの電極の間に形成される角度を観察します。最善の結果のためのヒントがバラバラ互いに指すのではなく、その先端と完全に平行あるいはマルチの上に単一の電極を低くしようとする任意の角度を避ける非常にわずかな "くさび"配置を形成する第1 multibarrelに触れる。シングルバレル先端は非常に柔軟であるので、それは先端がマルチバレル電極の上面に達した後、単一の電極を内蔵バネ作用量が少ないクリーンな複合チップを形成、さらに少し低下したときに曲がりますそれは一緒にヒントを保持するのに役立ちます。ただし、単一のバレルとmultibarrel電極との間の角度が急峻すぎる場合（くさびのあまり）、バネ作用が高くなりすぎると電極配置を下向きに曲がります。 結び付ける電極シャフト。のり一緒に2つの電極のシャフトを使用してシアノアクリレート（瞬間接着剤）。グルー·ドロップフラットつまようじとタッチ電極アセンブリの小さな側へ接着剤の小滴を配置します。ヒントの最も遠位の位置から開始し、徐々に電極先端に向かって極軸に沿って接着剤のドロップとつまようじを移動します。あまりにも多くの接着剤を使用して、または糊トンを適用電極チップにオブジェクト指向に近い、少なくとも部分的に機能しない電極をレンダリング、接着電極の開口部をもたらすでしょう。 歯科用セメントとの合弁安定させる。小さな使い捨てのプラスチック製の皿の中に歯科用セメントと歯科用アクリル少量のミックスやフラットつまようじを使用して、ボートの重量を量る。セメントは成形可能になるまで待ってから、ジョイント（ 図3のピンクの材料）を安定化するために2つの電極間の接合部に少量を適用します。約15分間乾燥させます。 電極を取り外し、保管してください。慎重完了ピギーバックマニピュレーターホルダーから第1電極を除去した後、スライドガラス、及び防塵容器内のストアから切り離す。 電極塗りつぶし溶液を調製電極フィル溶液を調製する。イオントフォレーシスは、荷電分子を必要とするので、ほとんどのエージェントは、通常、酸性またはアルカリ性の環境（のどちらかで溶解しなければならないそれぞれtaは、約3から4のpH、または約8-10のpH）。多くの場合、イオントフォレーシスで使用されている化学物質の数は、 表1に記載されています。表に記載されていないエージェントの場合、それは分子が帯電した保つために、酸性またはアルカリ性の環境で分子を使った方が簡単な場合、それに応じて溶解するであろうかどうか、pKa値から決定する。最良の結果を得るには、毎日新鮮なすべてのソリューションを混ぜる。 記入し、電極を準備記入し、電極を準備します。シリンジフィルターとシリンジに取り付けられた34ゲージの針 – ちょうど電極を使用する前に、炭素繊維28を用いて、それぞれの薬剤と各バレルを埋戻し。バランスバレルとして選択薬と5-バレル構成の4アウターバレル、および3M NaClを中心バレルを記入してください。同様に、3M NaClでシングルバレル記録電極を埋める。そのような速いグリーンまたはフェノールレッドとして、NaCl溶液に色素を追加すると、それが簡単に電極チップを見ることになります脳表面に電極の配置中。録画設定の電極ホルダーに電極を挿入し、適切なガラスバレルにすべてのワイヤを挿入します。断熱材の約1cmの先端に除去された絶縁された銀線を使用しています。 multibarrel電極（4薬物バレルと1バランシングバレル）に加え、記録シングルバレル電極に挿入する必要があるアンプ線用5線があるはずです。 イオントフォレーシス用ポンプモジュールの電源をオンにイオントフォレーシス用ポンプモジュールの電源をオンにして、すべての樽をテストします。各ポンプモジュールの電極テスト機能は、電極バレルが機能しているかどうかを判断するのに役立ちます。使用しないときは、分子電荷と反対極性の保持電圧を印加する必要があるときにバレルからの薬物の漏出を防止する。