Bioluminescent Imaging batterica<em> In Vivo</em
Summary
Questo articolo descrive la somministrazione di<em> Lux-tagged</em> Batteri ai topi e successive<em> In vivo</em> Analisi usando l'imaging bioluminescenza IVIS.
Abstract
Questo video descrive l'uso del corpo intero bioluminesce imaging (BLI) per lo studio di traffico batterica in topi vivi, con un'enfasi sull'uso di batteri in terapia genica e cellulare per il cancro. I batteri presenti una classe interessante di vettore per la terapia del cancro, in possesso di una naturale capacità di crescere preferenzialmente all'interno del tumore dopo somministrazione sistemica. Batteri ingegnerizzati per esprimere il gene lux cassetta rilevamento permesso BLI dei batteri e contemporaneamente siti tumorali. La posizione e livelli di batteri all'interno del tumore nel tempo può essere facilmente esaminato, visualizzati in due o tre dimensioni. Il metodo è applicabile ad una vasta gamma di specie batteriche e tipi xenograft tumorali. In questo articolo si descrive il protocollo per l'analisi dei batteri bioluminescenti in topi portatori di tumore sottocutaneo. Visualizzazione dei batteri commensali del tratto gastrointestinale (GIT) di BLI è anche descritto. Questo potente, ed economico, imaging in tempo reale strategia di rappresentantits un metodo ideale per lo studio dei batteri in vivo nel contesto della ricerca del cancro, in particolare per la terapia genica e le malattie infettive. Questo video illustra la procedura per lo studio lux-tag E. coli in topi vivi, che dimostrano la lettura spaziale e temporale BLI realizzabile utilizzando con il sistema IVIS.
Protocol
Discussion
Nel contesto della terapia genica, l'uso di agenti biologici per la consegna dei geni terapeutici per pazienti ha mostrato una grande promessa 3-5. Come virus, le proprietà biologiche innate di batteri consentirà una consegna efficiente DNA di cellule o tessuti, in particolare nel contesto di cancro. E 'stato dimostrato che i batteri sono naturalmente capaci di homing per tumori quando somministrati per via sistemica con conseguente livelli elevati di replica locale, sia esterni (non invasivi specie…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli autori desiderano ringraziare il sostegno necessario per questo manoscritto della Commissione europea Settimo programma quadro (PIOF-GA-2009-255466) e l'Irish Health Research Board (HRA_POR/2010/138). Lux-tag E. coli è stato un gentile dono del Dr. Cormac Gahan, University College Cork.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| 4T1 cell line | ATCC | CRL-2539 | Syngeneic breast cancer model derived from a spontaneously arising BALB/c mammary tumor |
| DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium |
| PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | Phosphate Buffered Saline |
| Xenogen IVIS | Caliper Life Sciences | IVIS 100 for 2D imaging; IVIS Spectrum for 3D. | |
| Luria Broth Miller (LB) | Sigma-Aldrich | L2542 | Growth medium for E. coli |
| Erythromycin | Sigma-Aldrich | E5389 | Antibiotic |
| Streptomycin | Sigma-Aldrich | S9137 | Antibiotic |
| MF1nu/nu mice | Harlan (UK) | 069(nu)/070(nu/+) | Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu |
| Balb/c mice | Harlan (UK) | 066 | Haplotype: H-2d |
| Gavage needle | Vet-tech Solutions (UK) | DE009 | 22G x 38mm straight gavage needle |
| Syringe for IV injection | BD BioSciences | 309309 – 1 ml | Insulin syringe with 28 G x ½ inch micro-fine IV needle. |
| Syringe for tumor inoculation | Braun | 9161376V | Omnifix 26 G x ½ inch needle |
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