증발 플럭스 방법 (EFM)를 사용 조사량과 탈수에 잎 유압 전도성과 Stomatal 전도성과 응답 측정

1. 수산화 잎에 대한 측정 잎 유압 전도성 (K 최대) 바람직 목부의 긴장은 젖은 종이 타월로 가득 어두운 비닐 봉지에 공기와 장소에서 절단, 낮은 것을 같은 저녁이나 밤에 촬영을 수집합니다. 실험실에서 수중 모든 촬영의 끝에서 적어도 두 개의 노드를 recut. 순수한 물, 또는 K 잎 측정에 사용될 수있는 다른 솔루션에 하루 아침에 rehydrate 쏠께 요. 다른 솔루션의 영향이 요인으로 조사 할 수없는 한 Ultrapure 물은 흐름 솔루션으로 권장합니다. 부분적으로 degassed 흐름 솔루션을 아래에 신선한 면도날로 촬영에서 잎을 잘라 요. 다른 솔루션의 영향이 요인으로 조사 할 수없는 한 Ultrapure 물은 흐름 솔루션으로 권장합니다. 우리는 진공 펌프를 사용하여 플라스크에 밤새 솔루션을 degassing 권장하지만, 다른 방법이 사용될 수있다. petio 주변 랩 미리 신장 parafilm잎자루와 튜브 사이 좋은 인감을 위해 르. 추가 parafilm을 래핑하면 튜브 내부에 맞게 잎자루 주위에 도움이 될 것 같은이 단계는, 비 원형 petioles 특히 도움이됩니다. 치과 붙여 넣기가 petioles의 홈을 채우기 위해 parafilm을 포장하기 전에 잎자루에 적용 할 수 있습니다. 시스템을 입력 공기를 방지하기 위해 ultrapure 물에 실리콘 튜브에 잎을 연결합니다. 잎은 물 소스 위에 올려진다 때, 튜브의 물 subatmospheric 압박이며, 어떤 공기가 측정하는 동안 튜브에 그려되지 않을 경우 따라서 인감이 양호합니다. Omnifit, 캠브리지, 영국),이 접근법은 특히 복잡한 형상과 petioles에 유용하거나, 잔디 블레이드에 대한 또는 실리콘 튜브에 직접 잎자루를 밀폐에, 고무 가스켓과 압축 피팅은 (예를 들어, (Omnifit A2227 구멍 어댑터 사용할 수 있습니다 , 그는 유리 막대 주위에 포장 및 압축 피팅을 밀봉 할 수 있습니다. 때 가능한, 그거에 직접 잎자루를 밀폐licone 관이 빠른 것하고 투명 잎자루-튜브 접합을 남겨두고 거품이보다 쉽게​​ 볼 수 있도록 수있는 이점이 있습니다. 튜브는 컴퓨터 (, Mettler-톨레도 (Toledo) GmbH의, Greifensee, 스위스 등은 "밸런스 링크"소프트웨어를 사용하여)에 매 30 초 데이터를 기록 밸런스 (± 10 μg 해상도)의 눈금 실린더에 실행 하드 튜브에 잎을 연결 잎을 통해 유량의 계산. 잎은 큰 상자 팬 위의 낚시 줄과와 광원 (> 1,000 μmol • m 2 • S -1 높은 방사 측정을위한 photosynthetically 활성 방사선), 약간의 레벨 위 아래에 매달아 나무 프레임에 adaxial 표면 위쪽으로 개최해야 눈금 실린더에있는 초승달 모양. 잎은 같은 겠어, 잎으로 이동 물은 증발에 의해 구동 및 중력에 의한 압력 아래에있는 잎을 입력되지 않도록하기 위해 눈금 실린더에 물 위에 삽입되어야합니다잎이 실린더에 물이 초승달 모양 아래 배치 된 경우가. 젖은 종이 타월로 가득 작은 용기 따라서 균형에서 분위기를 물 소스에서 증발을 피하고, 균형 공기가 물 포화을 보장하기 위해 균형 챔버 내부에 배치됩니다. 이 가능성은 튜브에 4 웨이 꼭지 밸브를 사용하여 잎에 흐름을 중단하고, 잔액에 물 실린더의 질량이 감소하지 않는 선택하여 확인하실 수 있습니다. 램프의 열을 흡수하기 위해 잎 위의 물이 담겨있는 명확한 Pyrex 컨테이너를 배치합니다. ° C 실험을하는 동안 열 램프 아래 잎 주위의 공기를 따뜻하게 충분히 Pyrex 컨테이너를 가열하지 않는 것과 같은 Pyrex 컨테이너에 더 차가운 물을 추가하여 23 ° C 및 28 사이의 잎 온도를 유지하고 있습니다. 따라서 높은 조사량에 순응하기 위해 충분한 시간을 제공하고, additi, 적어도 30 분을위한 장치에 발산에 잎 허용onally까지 유속은 더 상향 또는 하향 추세로, 안정화, 그리고 변화의 계수 <30 초 유동 간격으로 한 최소한 5-10 측정 5 %로하고 있습니다. 이 방법은 안정적인 Ψ 잎을 가정하기 때문에 유량이 정상 상태에 도달하는 것이 중요합니다. 이전 연구는 이러한 기준 유량 (E), Ψ 잎과 K 잎의 안정화에 충분한 것으로, 안정적인 흐름을 한 후 더 이상 측정 기간과 시험은 폭 넓은 일곱 종의 각각에 대해 측정 시간에 K 잎 대한 관계를 보여주지 설립 잎 용량 17,18 범위. 안정화는 일반적으로 30 분 미만이 소요되지만 일부 종에서 종 (种)에 대한 시간 이상이 필요할 수 있습니다. 참고 : 유량 (<8 μg의 -1) 매우 낮은 경우, 안정성이 마지막 다섯 30 초 간격의 실행중인 평균을 사용하여 결정 할 수 있습니다. </p> 갑자기 흐름이 변경 하나 때문에 갑자기 stomatal 폐쇄에, 또는 입자 또는 기포에 의한 시스템의 인감이나 막힘에서 명백한 누설하는 경우 측정을 폐기하십시오. 흐름이 안정화되면 열전대와 잎의 온도를 기록합니다. 신속 튜브에서 잎을 제거, 소량은 잎자루을 건조 증발를 중단하기 이전에 exhaled 된 sealable 가방에 잎을 배치합니다. 잎은 적어도 20 분에 그 가방에 평형 보자. 최종 10 유량 측정 평균. 이렇게하면 E 측정 될 것입니다. 잎이 equilibrated 경우, 압력 챔버와 최종 잎 물 전위 (Ψ 최종)을 측정합니다. 평판 스캐너 및 이미지 처리 소프트웨어를 사용하거나 잎 지역 미터와 잎 영역을 측정합니다. K 잎은 E / – ΔΨ 잎 (여기서 ΔΨ 잎 = Ψ 마지막으로 계산됩니다 </하위> – 0 MPA) 및 잎 면적 별도의 정상화. 단위 mmol에서 m -2 s의 -1 MPA -1입니다. 잎은 단지 눈금 실린더의 물 레벨보다 위에 위치하기 때문에 잎을 입력 물 압력을 감소 중력의 효과는 항상> -0.1 MPA입니다 Ψ 마지막에 특히 상대적으로 무시할 것입니다. 물 점도 15,19,20의 온도 의존성에 의해 유도 K 잎의 변화를 해결하려면 다음 방정식을 사용하여 25 ° C로 K 잎 값을 표준화 : E 증기 pressu에 해당 잎 – 투 – 공기 증기 압력 차이에 의해 구분으로 Stomatal 전도성 (g들) 결정될 수잎에 인접 온도 및 상대 습도 센서를 사용하여 결정 재 적자 (VPD). VPD는 다음 방정식에게 21을 사용하여 계산됩니다 (; 아덴 벅 방정식 22에 의하면, 온도의 함수 kPa에서), 그리고 AP 대기압 (kPa)을 RH는 상대 습도이고, VP는 공기의 포화 증기 압력을 표시합니다. 2. 건조 잎에 잎 유압 컨덕턴스 측정 바람직 목부의 긴장은 젖은 종이 타월로 가득 어두운 비닐 봉지에 공기와 장소에서 절단, 낮은 것을 같은 저녁이나 밤에 촬영을 수집합니다. 실험실에서 수중 모든 촬영의 끝에서 적어도 두 개의 노드를 recut. K 르에 사용되는 순수한 물, 기타 용액에 하루 아침에 rehydrate 쏴AF 측정. 다른 솔루션의 영향이 요인으로 조사 할 수없는 한 Ultrapure 물은 흐름 솔루션으로 권장합니다. ultrapure 물 아래에 적어도 세 잎 세그먼트에 촬영을 잘라 Ψ 잎 값의 범위에 시간이 서로 다른 기간 동안 팬과 함께 촬영을 탈수. 촬영의 각 잎 주위 이전에 exhaled 된)을 한 다음 젖은 종이로 큰 sealable 가방에 모든 촬영을 배치, 일단 촬영 수분이 있으며, sealable 가방 (Nasco, 포트 앳킨슨, WI, USA 소용돌이 – 박)을 배치 수건. 촬영은 최소한 30 분 (강력 탈진 촬영을 위해 더 이상 평균 시간이 필요 할 수 있습니다)에 대한 평형 보자. 평균 한 후, 소비세 상단과 하단 잎 및 측정 초기 Ψ 잎 (= Ψ O) 압력 챔버를 사용합니다. 두 잎의 Ψ 잎의 차이가보다 큰 0.1 MPA (stron의 경우 촬영을 취소gly 건조 잎이 범위)이 0.3 MPA까지 연장 할 수 있습니다. 세 번째 잎 그런 다음 위의 단계를 1.2 -1.18 따라 EFM와 K 잎과 g을 결정하는 데 사용됩니다. 특히, 정상 상태 E는 stomata가 계속 열고 cuticular 도전 17보다 실질적으로 높은 g의 값을 생성으로, 심한 건조 잎되었습니다 잎에도 구할 수 있습니다. 유압 취약성 곡선을 구성하는 단계 1.16에서와 같이 Ψ 최종을 사용하여 K 잎을 계산 한 후 가장 낮은 중에서 대한 플롯 K 잎 값 Ψ O 또는 Ψ 최종 즉, 실험이 진행되는 동안 잎에 의해 경험 강한 탈수 (= Ψ 낮은 가격순). 마찬가지로, 잎 탈수에 대한 응답으로 g s의 감소는 낮은 Ψ에 대한 g을 음모에 의해 결정될 수있다. 이전 작업은 쉬가 자신이 탈수는 K 잎과 g의 14,16에서 적어도 부분적으로 돌이킬 수 감소를 유도. 우리는 Ψ 낮은 0.5 MPA 간격마다 적어도 6 K 잎 값을 취득하는 것이 좋습니다 (당신이 작업중인 종 탈수에 정말 취약 경우이 간격은 0.25 MPA를 줄일 수 있습니다.) 귀하의 취약점 곡선 23 일부터 특이점을 제거하는 가장 Ψ 각 0.5 MPA 물을 가능성이 간격 K 잎 값에 딕슨 국외자 테스트를 수행합니다. 종 탈수 14,16에 K 잎과 g s의 응답에 차이가 있기 때문에, 각 종에 대해 서로 다른 기능에 맞게하고 최대 가능성 (낮은 가격순 AIC 값을, 자세한 내용은 14 참조)을 선택합니다. 우리는 이전에 문학에 사용되는 피팅 최소한 네 기능을하는 것이 좋습니다 : 선형 (PG "강한 : 콘텐츠 폭 ="1.4in "강한 : SRC ="/ files/ftp_upload/4179/4179eq3highres.jpg "/>), sigmoidal ( ), 물류 ( )와 지수 ( ). 3. 대표 결과 탈수와 잎 유압 전도성의 하락은 종 (그림 1)에서 강력하게 다릅니다. 높은 조사량에 따라 측정 할 때 가뭄에 민감한 종보다 가뭄 저항성 종보다 부정적인 물 잠재력에 강한 하락을 경험 (PAR> 1,000 μmol • m -2 • S -1). 물mesic 허브 Helianthus annuus을위한 유압 전도성의 80 % 손실 (P 80)의 잠재력은 캘리포니아 키 작은 떡갈 나무 덤불에 기본 Heteromeles arbutifolia의보다 부정적인 3 MPA였다. Helianthus annuus이 아닌을 보여 주었다 반면 Heteromeles arbutifolia는, 물 잠재력의 감소에 선형 응답 감소 – 선형. stomatal 전도성 (g들)과 리프 유압 전도성 (K 잎)에는도 (그림 2) 조사량에 크게 응답 할 수 있습니다. Raphiolepis indica를 들어, stomatal 전도성이 높은 조사량에 따라 측정 잎 탈수를 강하게 거부했다 (PAR> 1,000 μmol • m -2 • S -1)과 실험실 빛 아래에서 (PAR <6 μmol • m -2 s -1). 높은 방사에서 잘 조명 레아에 대한 일반적인 물 잠재적으로 탈진 상태였다 efm로 측정 잎낮에 그대로 식물에 ves는 porometer (그림의 성. 2)로 공장에서 잎으로 유사한 g을 보여 주었다. 특히, 최대 수화의 잎을 위해, k 잎은 낮은 조사량 (11 대 2.8 mmol s의 -1 mpa -1)보다 높은에 노출 잎에는 4 배 이상이었고, 따라서 잘에 강한 빛 응답을 주었다 g s보다 충분한 잎. 또한, 조사량에 따라, 탈수으로 더 강력하게 거부했다. p 80 조사량보다 높은에서 0.93 덜 부정적이었다. 그림 1. 민감한 가뭄 (위)와 관대 (아래) 종 (14,24에서)에 잎 유압 취약점 곡선. 각 포인트는 죄를 나타냅니다증발 플럭스 방법 (efm)을 사용하여 단독 잎에 전도성 (k 잎)의 gle은 측정. 수직 막대는 종이 초기 (p 80)의 %를 잃어되는 가능성을 나타냅니다. 가장 적합한 기능을 모두 종에 역모 있습니다. 2. raphiolepis indica에 감소 stomatal (g들)과 반응은 (16 일부터)에 따라 (par은> 1,000 <6 나타냅니다.