Mit den Eizellen<em> Schistosoma mansoni</em> Als ein<em> In vivo</em> Modell von Helminthen-induzierten Lungenentzündung
Summary
Schistosoma mansoni Eier sind potente Stimulatoren der T-Helferzellen vom Typ 2 (Th2) Immunantwort, die charakteristisch für Parasitenbefall, Asthma und allergische Entzündung. Dieses Protokoll nutzt S. mansoni Ei Injektion an einen CD4 Th2-Zytokin-induzierte Entzündungsreaktion in der Lunge, Lunge durch Granulombildung um das Ei gekennzeichnet, Eosinophilie und Makrophagen-Aktivierung Alternative zu generieren.
Abstract
Schistosoma Parasiten sind Blut-Egel, die schätzungsweise 200 Millionen Menschen weltweit ein infizieren. Bei der chronischen Infektion mit Schistosoma, die schwere Pathologie, einschließlich Leberfibrose und Splenomegalie, wird durch die Immunantwort gegen den Parasiten Eier anstatt den Parasiten selbst 2 verursacht. Parasiteneier Induktion einer Th2-Antwort durch die Produktion von IL-4, IL-5 und IL-13, die alternative Aktivierung von Makrophagen und die Ansammlung von Eosinophilen ist. Hier beschreiben wir Injektion von Schistosoma mansoni Eier als Modell, um Parasiten-spezifische Th2-Zytokin Reaktionen in der Lunge und Lymphknoten, die Bildung von Granulomen pulmonalen rund um das Ei, und Entzündung der Atemwege zu untersuchen.
Nach intraperitonealer Sensibilisierung und intravenöse Herausforderung, S. mansoni Eier werden in die Lunge über den Lungenarterien, wenn sie im Lungenparenchym eingeschlossen transportiertdurch Granulome von Lymphozyten, Eosinophilen und alternativ aktivierten Makrophagen 3-6 besteht. Verbunden mit Granulombildung, Entzündung in den bronchoalveolären Raum, Ausdehnung der Lymphknoten-und CD4-T-Zell-Aktivierung beobachtet werden kann. Hier haben wir ausführlich das Protokoll zur Isolierung von Schistosoma mansoni Eier aus infizierten Lebern (modifiziert nach 7), Sensibilisierung und herausfordernd Mäuse, und die Rückgewinnung der Organe (bronchoalveoläre Lavage (BAL), Lunge und Lymphknoten) für die Analyse. Wir berücksichtigen auch Vertreter histologischen und immunologischen Daten und Vorschläge für weitere immunologische Analyse.
Insgesamt liefert diese Methode ein in vivo Modell zu Helminthen ausgelösten immunologischen Reaktionen in der Lunge zu untersuchen, was ist breit anwendbar auf das Studium der Th2 entzündlichen Erkrankungen einschließlich Wurminfektionen, fibrotische Erkrankungen, allergische Entzündungen und Asthma. Vorteile dieses Modells für die Untersuchung von typ.e 2 Entzündung in der Lunge sind die Reproduzierbarkeit eines potenten Th2-Entzündungsreaktion in der Lunge und Lymphknoten, die Leichtigkeit der Beurteilung von Entzündungen, die durch die histologische Untersuchung der Granulome rund um das Ei, und das Potenzial für langfristige Lagerung des Parasiten Eier.
Protocol
Discussion
Hier wird ein Modell beschäftigt Schistosoma mansoni Eier zu Typ-2-Lungen-Entzündung zu induzieren beschrieben. Charakteristische Merkmale dieses Modells sind die potenten Th2-Immunantwort, Entzündung der Atemwege und Lungen Granulombildung. Da diese Parameter in Abhängigkeit vom Th2 CD4-Zell-Antworten 11 sind, ist dies ein nützliches Modell zur Untersuchung der Auswirkungen von Protein-spezifischen oder Linie-spezifische Deletionen auf Th2-Zell-Reaktionen zu untersuchen. Hier die Anzeigen würd…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde von den National Institutes of Health (NIH) AI091759 und dem Morbus Crohn und Colitis Foundation of America von William und Shelby Modell Family Foundation-Forschungspreis (bis Mn) unterstützt. Schistosome-infizierte Mäuse wurden von der NIAID Schistosome Resource Center (NIAID Contract N01 A130026) geliefert.
Materials
| Reagent | Size/Description | Company | Catalog # |
| Collagenase/Dispase | 500 mg | Roche Applied Science | 11 097 113 001 |
| Diff Quik Hema 3 Stain | Pack | Fisher Scientific Co. LLC | 122-911 |
| DMEM | Liquid | Gibco | 11965 |
| Falcon 50mL | Pack | Falcon | 352070 |
| Intramedic PE Tubing | 0.58 mm | Becton Dickinson and Co. | 427410 |
| Isoflurane | 250 mL | Abbot Animal Health | 52600405 |
| Ketamine | 100 mg/mL | Fort Dodge, Animal Health | N/A |
| Mannose receptor antibody | Biotin | AbD Serotec | MCA2235B |
| Metallic Strainer | Standard kitchen strainer | Target | Laurentiis |
| Paraformaldehyde | 16% | Electron Microsc. Sciences | 15710 |
| Penicillin/ Streptomycin | 100x | Gibco | 15070 |
| Percoll | 1 Liter | GE Healthcare Biosciences | 17 0891 01 |
| RELMα antibody | 50 μg | Peprotech | 500-P214 |
| Surgical Thread | 2.0 USP 100 yds | Surgical Specialties Corp. | SP118 |
| Syringe Needle | 23g, 3/4 inch | BD Vacutainer Lab. Med. | 305143 |
| USA Standard Testing Sieve | 150 μm, 0.0059″ | W.S. Tyler, Inc. | ASTME-11, Spec. No. 100 |
| Xylazine | 20 mg/mL | Butler | N/A |
Riferimenti
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