从使用鸡蛋<em>血吸虫</em>作为<em>在体内</em>蠕虫引起的肺部炎症模型
Summary
血吸虫卵是强有力的刺激T辅助2型（Th2细胞）的免疫反应，寄生虫感染的特点，哮喘和过敏性炎症。该协议利用S。血吸虫卵注射产生的CD4 Th2细胞因子诱导的炎症反应在肺，肺肉芽肿形成的特点，各地的鸡蛋，嗜酸性粒细胞和巨噬细胞替代激活。
Abstract
血吸虫寄生虫血吸虫感染估计有200万人，全世界1。在血吸虫 ，严重的病理，包括肝纤维化和脾肿大，慢性感染引起的免疫反应，而不是寄生虫本身2寄生虫卵。寄生虫卵诱导Th2反应特点是生产的IL-4，IL-5和IL-13，替代激活的巨噬细胞和嗜酸性粒细胞的招聘。在这里，我们描述了一个模型来研究特定的寄生虫在Th2细胞因子反应和肺淋巴结，形成肺肉芽肿周围的蛋，呼吸道炎症注射血吸虫卵。
腹腔宣传和静脉的挑战， 与血吸虫卵被运送到肺，通过他们被困在肺实质的肺动脉由淋巴细胞，嗜酸性粒细胞和另外激活的巨噬细胞3-6组成的肉芽肿。与肉芽肿形成，在炎症的支气管肺泡空间关联的，扩大的淋巴结和CD4 T细胞活化可以观察到。这里我们详细介绍了协议隔离（从7修改）感染的肝血吸虫卵，敏感和具有挑战性的老鼠，和恢复分析机关（支气管肺泡灌洗（BAL），肺和淋巴结）。我们也有代表性的组织学和免疫学数据和其他免疫分析的建议。
总体而言，这种方法提供了在体内模型，以探讨在肺寄生虫引起的免疫反应，这是广泛适用于Th2细胞的炎症性疾病，包括寄生虫感染，纤维化疾病，过敏性炎症和哮喘的研究。这种模式的优势，为典型研究E 2的肺部发炎，包括一个强有力的Th2细胞在肺部的炎症反应和淋巴结的重复性，便于鸡蛋周围的肉芽肿病理检查炎症的评估，和潜在的长期存储的寄生虫鸡蛋。
Protocol
Discussion
在这里，介绍一个模型，采用血吸虫卵诱导2型肺部发炎。这种模式的典型特征包括强有力的Th2型免疫反应，气道炎症和肺肉芽肿形成。由于这些参数依赖CD4 Th2细胞的反应11，这是一个有用的模型，探讨Th2细胞反应的特定蛋白质或特定谱系缺失的影响。这里的读数将包括抗原特异性Th2细胞因子的量化分析，呼吸道细胞浸润，肺肉芽肿的大小。一个额外的参数，可衡量的是鸡蛋引起的?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由美国国立卫生研究院（NIH）AI091759和克隆氏病和结肠炎基金会美国的威廉·谢尔比参数及家庭基金会研究奖（MN）的支持。 NIAID的血吸虫资源中心（NIAID的合同N01，A130026）提供的血吸虫感染小鼠。
Materials
| Reagent | Size/Description | Company | Catalog # |
| Collagenase/Dispase | 500 mg | Roche Applied Science | 11 097 113 001 |
| Diff Quik Hema 3 Stain | Pack | Fisher Scientific Co. LLC | 122-911 |
| DMEM | Liquid | Gibco | 11965 |
| Falcon 50mL | Pack | Falcon | 352070 |
| Intramedic PE Tubing | 0.58 mm | Becton Dickinson and Co. | 427410 |
| Isoflurane | 250 mL | Abbot Animal Health | 52600405 |
| Ketamine | 100 mg/mL | Fort Dodge, Animal Health | N/A |
| Mannose receptor antibody | Biotin | AbD Serotec | MCA2235B |
| Metallic Strainer | Standard kitchen strainer | Target | Laurentiis |
| Paraformaldehyde | 16% | Electron Microsc. Sciences | 15710 |
| Penicillin/ Streptomycin | 100x | Gibco | 15070 |
| Percoll | 1 Liter | GE Healthcare Biosciences | 17 0891 01 |
| RELMα antibody | 50 μg | Peprotech | 500-P214 |
| Surgical Thread | 2.0 USP 100 yds | Surgical Specialties Corp. | SP118 |
| Syringe Needle | 23g, 3/4 inch | BD Vacutainer Lab. Med. | 305143 |
| USA Standard Testing Sieve | 150 μm, 0.0059″ | W.S. Tyler, Inc. | ASTME-11, Spec. No. 100 |
| Xylazine | 20 mg/mL | Butler | N/A |
Riferimenti
- World Health Organization. Prevention and control of schistosomiasis and soil-transmitted helminthiasis: report of a WHO expert committee. WHO Technical Report Series 912. , (2002).
- Pearce, E. J., MacDonald, A. S. The immunobiology of schistosomiasis. Nat. Rev. Immunol. 2, 499-511 (2002).
- Sandler, N. G. Global gene expression profiles during acute pathogen-induced pulmonary inflammation reveal divergent roles for Th1 and th2 responses in tissue repair. J. Immunol. 171, 3655-3667 (2003).
- Perrigoue, J. G. IL-31-IL-31R interactions negatively regulate type 2 inflammation in the lung. J. Exp. Med. 204, 481-487 (2007).
- Sandor, M., Weinstock, J. V., Wynn, T. A. Granulomas in schistosome and mycobacterial infections: a model of local immune responses. Trends Immunol. 24, 44-52 (2003).
- Nair, M. G. Alternatively activated macrophage-derived RELM-{alpha} is a negative regulator of type 2 inflammation in the lung. J. Exp. Med. 206, 937-952 (2009).
- Dalton, J. P. A method for the isolation of schistosome eggs and miracidia free of contaminating host tissues. Parasitology. 115, 29-32 (1997).
- Lewis, F. A. Large-scale laboratory maintenance of Schistosoma mansoni, with observations on three schistosome/snail host combinations. J. Parasitol. 72, 813-829 (1986).
- Tilney, N. L. Patterns of lymphatic drainage in the adult laboratory rat. J. Anat. 109 (Pt. 3), 369-383 (1971).
- Lewis, F., Coligan, J. E. Schistosomiasis. Current protocols in immunology. Chapter 19, Unit 19 (2001).
- Kaplan, M. H. Th2 cells are required for the Schistosoma mansoni egg-induced granulomatous response. J. Immunol. 160, 1850-1856 (1998).
- Wynn, T. A. Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm. Nat. Rev. Immunol. 4, 583-594 (2004).
- Cheever, A. W. Variation of hepatic fibrosis and granuloma size among mouse strains infected with Schistosoma mansoni. Am. J. Trop. Med. Hyg. 37, 85-97 (1987).
