Cornée Préparation tissu du donneur pour kératoplastie endothéliale

1. Configuration: une technique aseptique 11 Allumez Hotte à flux laminaire (LFH). Allumez l'unité de contrôle de gaz d'azote. Assurez-vous que le tuyau est connecté entre l'unité de la console et le réservoir d'azote. Ouvrir le gaz. Réglage du gaz doit être réglé à 50-60 PSI sur le réservoir régulateur. La pression sur l'unité Turbine devrait se lire de 3,3 à 3,4 bars. Appuyez sur le bouton de test. La pression atmosphérique sera lu dans les 700s et les pompes 1 et 2 devrait être inférieur à 200. L'unité émet un bip lorsque le test est terminé. Masque de Don avec des lunettes de protection, le cas échéant, et le capuchon. Se laver les mains et don de gants non stériles. Placez à l'intérieur des kits stériles enveloppements LFH et ouvert à établir un champ stérile. Placez une tasse médecine stérile et une cuvette en plastique stérile avec une gaze stérile à côté du champ établi stérile. Verser l'alcool isopropylique stérile dans la coupe de la médecine. Essuyez la sonde pachymétrie avec tampon imbibé d'alcool / pad et la sonde lieu, la pointe en bas, dans la coupe de la médecine. La pointe de la sonde doit tremper dans l'alcool isopropylique à 10 minutes. Après la sonde pachymétrie a trempé pendant 10 minutes, rincer la pointe de la sonde avec de l'eau stérile de la seringue préremplie pour éliminer l'alcool et de la sonde dans le bassin en plastique. En utilisant une technique aseptique, ouvrir et laisser tomber des objets stériles (lame, gants stériles, et la cornée chambres affichage) sur le champ stérile sauf si déjà partie de la meute pré-faites. Obtenir tissu cornéen dans les médias et la préservation de lieux à l'intérieur de LFH (Figure 2). Ouvrez le flacon (s) et de disposer du couvercle (s) dans un récipient approprié biohazard. Jeter des gants non stériles. Enfiler des gants stériles. Placer préemballé cuvette en plastique sur le côté du champ où pachymètre est situé. Connecter la ligne de perfusion à robinet et le lieu pic de fin de ligne de perfusion à l'extérieur de la hotte de la ligne de fixation de manière à empêcher la ligne de l'extérieur de la hotte de revenir sur le capot et touchant le champ stérile. Effectuez le transfert du tissu cornéen. Verser délicatement le tissu et moyennes entreprises, dans un single mouvement, à partir du flacon existant à une chambre de visualisation stérile. Soyez sûr de garder le côté endothélial vers le haut. Placer le capuchon sur la chambre. Gardez chambres contenant des tissus et des médias sur le champ stérile. Retirez le flacon (s) à partir de LFH. Retirez et jetez les gants stériles. Solution saline équilibrée de Spike (BSS) bouteille avec la ligne de perfusion. Accrochez bouteille de stériles BSS environ quatre pieds de la surface de la zone de travail. Ouvrez les deux paires de gants stériles et une blouse stérile avec une serviette. Exécuter six gommage minute chirurgicale et les mains sèches. Mettez une blouse stérile, puis les deux paires de gants stériles. Ouvrez les boîtes d'instruments et placer le contenu sur le champ stérile. Distribuer 10-20 cc de la solution BSS en métal bassin ou une tasse de médecine. Remplissez pipette stérile avec une solution BSS. Connectez robinet et la ligne de perfusion au port de perfusion de la chambre antérieure et rincer avec de BSS de sorte qu'une petite quantité est visible sur le dessus du piston. Chambre de position artificielle en LFH surhaut de la gaze. Basse piston en tournant la bague de serrage du greffon dans le sens antihoraire. 2. Procédure En utilisant le forceps, pincez doucement la cornée par le rebord scléral. Ouvrir le robinet pour rincer le système avec BSS tout en prenant soin de centrage cornée sur le dessus du piston avec le côté endothélial vers le bas. Si des bulles sont visibles sous la cornée, de continuer la perfusion avec BSS et en déplaçant légèrement la cornée afin de les supprimer. Interrompre la perfusion une fois les bulles d'air sont supprimées. Faire en sorte que la cornée est centrée sur le piston (figure 3a). Couvercle de la chambre antérieure de position sur la bague de verrouillage de base de sorte que les pattes du couvercle en forme dans les espaces ouverts sur la base. De verrouillage du couvercle dans la base en tournant dans le sens horaire de couverture de 15 °. Soulever le piston de serrer complètement (Figure 3b). Avec un doigt ganté stérile, toucher haut de la cornée afin de s'assurer que la pression est suffisante pour effectuer la procédure. Vérifiez la pachymétrie en plaçant la sonde sur la surface of cornée afin d'obtenir la lecture épaisseur (figure 4). L'écart-type doit être inférieur à 10. Si ce n'est pas, reprendre la mesure. Avec la main gantée stérile qui n'a pas été utilisé pour effectuer la pachymétrie, passer le tuyau de turbine à la main qui a effectué la pachymétrie et visser le tuyau de la turbine dans l'unité de contrôle. Demandez au technicien de lecture aidant dossier pachymétrie. Enlever les gants contaminés. Utilisation de marqueur stérile, tracer une ligne de 4mm de limbe vers le centre de la cornée (ou ne pas marquer si le chirurgien préfère pas de marquage). Utilisez la pipette pour placer cinq gouttes de BSS sur le dessus de la cornée. Sauf instructions spécifiques sont fournies par le chirurgien, la tête de coupe 300 um sera utilisée que si la mesure pachymétrie pré-coupe est inférieure à 600 um. Si plus de 600 um, la tête de coupe 350 um sera utilisé. Avec filetage vers vous et le numéro de face, chargez la lame dans le côté droit de la tête de microkératome, bout pointu en premier, en évitant le contact wie la lame. Tenir la tête de chaque côté, tête de vis sur la turbine. Serrer la chambre artificielle avec les doigts. Visser la turbine sur le tuyau de la turbine. Testez l'oscillation de la lame en appuyant sur la pédale de vide une fois, l'immersion de la tête de coupe dans l'eau stérile et le pouls de la turbine pendant 5 secondes. Resserrer piston. Lieu microkératome sur la base avec support de montage et de la position à cinq heures. Appuyez et maintenez enfoncé la pédale de turbines à osciller la lame (figure 5a). Utilisation de l'index et le pouce, maintenez à mi-chemin entre le microkératome base et le sommet de la turbine. Tourner le poignet pour faire une coupe régulière et uniforme à travers et à travers la cornée. Turbine relâchement de la pédale droite et soulevez microkératome unité de production. Appuyez sur la pédale à vide pour éteindre vide (figure 5b). Don d'un gant stérile et lecture pachymétrie revérifier après capot cornéen est enlevé en plaçant la sonde sur la surface de la cornée pour obtenir une lecture seconde épaisseur étantconscient du fait que le tissu est très mince et facilement endommagé. Retirer gants contaminés. Avez aider technicien lecture pachymétrie deuxième disque. Utilisation de marqueur stérile, placez une marque si demandé par le chirurgien, sur le bord à mi-périphérique du lit stromal résiduel dans la chambre artificielle. Placez quelques gouttes de stériles BSS sur le lit stromal résiduel. Retirez le bouchon cornée antérieure du microkératome (Figure 6) et de le remplacer sur la cornée avant de retirer la cornée à partir de la chambre antérieure artificielle. Cap doit être centré sur la cornée à l'aide de marquage périphérique pour aligner correctement le bouchon s'il ya lieu. Utilisez lance tige doucement repositionner le bouchon sur la cornée. Utilisez lance frais pour absorber toute BSS sous plafond antérieur. Ouvrir le robinet, tourner à la chambre à l'envers et piston inférieur ralentir suffisamment pour empêcher la cornée de se déformer. Déverrouiller base et permettre à la pression de l'écoulement BSS pour pousser la coupelle chambre artificielle de la base. Avec des pinces, tirez doucement sur unet la jante de la cornée à 9, 12 et 03 heures positions pour le desserrer de la tasse. Une fois relâché, utilisez une pince à la position 12 heures pour enlever la cornée. Placez la cornée dans la chambre de visualisation, jusqu'à côté endothélial (figure 7). Placez le couvercle sur la chambre de visualisation. Retirer gant stérile. Serrer visualisation couvercle de la chambre. Effectuer l'évaluation post-coupe la lampe à fente et en microscopie spéculaire de la cornée et les résultats record. Chambre de la Place (s) dans la section appropriée du réfrigérateur. Paquet pour le transport d'chirurgien (figure 8). 3. Les résultats représentatifs Une bonne dissection microkératome mécanique des résultats cornée du donneur en douceur, le tissu uniforme des bailleurs de fonds lamellaire de la cornée. Ceci est illustré par une tomographie par cohérence optique (OCT) l'image de la cornée en coupe transversale (Figure 9). La finale du tissu cornéen doit être postérieure d'une épaisseur suffisante, telle que mesurée par pachymetry. Au cours des 6 derniers mois à la Banque d'yeux du Michigan, la moyenne pré-traitement épaisseur de la cornée était 558 microns, et de post-traitement épaisseur du tissu cornéenne postérieure était de 158 microns. Quatre-vingt-sept pour cent des microkératome-disséqué tissu du donneur mesurée entre 100-200 microns, 10,9% mesurés> 200 microns, et de 2,1% mesuré moins de 100 microns. Le tissu cornéenne postérieure doit conserver à haute densité de cellules endothéliales (DPE) pour fournir une meilleure fonction endothéliale à l'receveur de greffe. Microscopie spéculaire est utilisé pour mesurer le DPE. Au cours des 6 derniers mois, tout le tissu de la cornée jugés admissibles pour kératoplastie endothéliale de l'Oeil du Michigan Banque mondiale a un DPE de> 2200 cellules / mm 2. Quatre-vingt-neuf pour cent du tissu prédécoupé SDKEA eu un post-traitement DPE> 2400 cellules / mm 2, et 19% avaient un DPE> 3000 cellules / mm 2. La variation moyenne de la pré-à post-traitement DPE était négligeable à 1,2% (p = 0,0003, jumelé à deux queues t-test).Les complications qui peuvent survenir lors de la procédure comprennent la perte de la pression, la dissection asymétrique, et le retrait significatif des tissus (résultant en une perte de cellules endothéliales de cornée). Dissection inadéquate peut également entraîner la perforation des tissus. Figure 1. Schéma global de la préparation du tissu cornéen pour les figures kératoplastie endothéliale 1a à 1e sont transversales des représentations de la préparation cornée du donneur. Figures 1f à 1i sont transversales des représentations de la cornée du receveur de transplantation au cours de la chirurgie SDKEA. La cornée du donneur est monté sur une chambre antérieure et disséqué artificielle avec la tête microkératome. Après dissection des tissus, les deux lamelles sont séparées, mais la partie antérieure lamelles (cap) est positionné sur le lit est resté la cornée pour le transport pour le chirurgien. Dans lesalle d'opération, le chirurgien utilise un trépan pour couper le tissu de la cornée centrale verticalement à travers lamelle à la fois antérieur et postérieur. Après la coupe trépan, la cornée du donneur périphérique est retiré du terrain. La lamelle postérieure est légèrement retiré de la lamelle antérieure avec une spatule. Le donneur postérieure lamelles (tissus SDKEA) remplace la partie malade de la cornée destinataire (1i). Le patient a une cornée malade postérieure à être enlevé. La cornée malade postérieure est marqué avec un instrument intraoculaire (inverse Sinsky crochet) dans un cercle de grand diamètre. Après avoir marqué la cornée malade, la membrane cornéenne postérieure est enlevée. Le donneur postérieure lamelles (tissus SDKEA) est placé dans l'oeil du receveur. Figure 2. Tissu de la cornée dans les médias. Tissu cornéen est en milieux de conservation après harvesting du donneur. Figure 3. Tissu de la cornée sur chambre antérieure artificielle. Tissu de la cornée est monté sur la chambre antérieure artificielle avant anneau de verrouillage de base ou la dissection des tissus. Tissu de la cornée est monté sur la chambre antérieure artificielle avec bague de serrage de base scellée sur le tissu. Figure 4. L'épaisseur du tissu cornéen Vérifiez. L'épaisseur cornéenne est vérifiée à l'aide de sonde à ultrasons sur la surface de la pachymétrie de la cornée. Figure 5. Dissection du tissu cornéen. Microkératome lame est placé sur la base avec tige de montage et la position cinq heures. Microkératomeest passé à travers la cornée de faire la dissection lamellaire. Figure 6. Cap antérieure de la cornée après dissection. Le bouchon cornée antérieure est libre après dissection microkératome est terminée. Figure 7. Disséqué cornée Voir le Chambre. Après dissection est terminée, la cornée est retourné à la chambre de visualisation pour le transport. Figure 8. Cornée en Conditionnement pour le transport. La cornée dans la chambre de visualisation est ensuite emballés de manière sûre pour le transport pour le chirurgien. Figure 9. Apparence OCT de la cornée. L'OCT de l'finale cornée disséqué (en coupe) montre que la cornée est divisé en deux moitiés. L'interface est plus intensément réfléchissante que le tissu environnant, comme indiqué par la flèche.