Basit ve Sağlam In vivo Ve In vitro Yaklaşım

Insan, hayvan ve bitkiler, yavrulama encapsidation olgun ve kararlı virionlar içine kadar pozitif polariteli RNA genomu patojen olan virüsler belirli bir konak enfeksiyon kurulması sırasında bir kardinal aşamasıdır. Sonuç olarak, encapsidation çalışma know-how bulaşıcı virionlar oluşturmak için virüs montaj düzenleyen mekanizmasının ilişkin bilgileri tercümesini. Bu bilgiler, virüs yaymak ve hastalık kontrolü düşürücü yeni yöntemler oluşturulmasında hayati önem taşımaktadır. Virüs encapsidation in vivo ve in vitro olarak ele alınabilir. In vivo Genom encapsidation makromoleküler etkileşimleri ve hücre içi kompartımanlara içeren oldukça düzenli bir seçici bir süreçtir. Bu nedenle, in vivo virüs encapsidation kapsayan olaylar virüsler çoğalır ve montajı nasıl anlamak için temel bilgi sağlayacaktır incelemek önde gelen eğitim. Son zamanlarda in vitro encapsidation biyomedikal ima alanında araştırma için istismar edilmiştirging ve terapötik uygulamalar. Zarfsız bitki virüslerinin negatif yüklü yabancı madde in vitro encapsidation içinde bir girişim çok daha önde duruyor. Brom mozaik virüsü (BMV), bitkiler için bir zarfsız çok bileşenli bir RNA virüsünün patojenik, in vivo ve in vitro paketleme genomunun çalışmak için bir model olarak sistemi kullanılmıştır. Nicotiana benthamiana bitkilerde encapsidation testlerde, Agrobacterium geçici ifadesi, agroinfiltration dediğimiz aynı hücreye birden çok bileşenden senkronize teslimat ve ifade için verimli ve güçlü bir tekniktir. Bu yaklaşımda, desiredviral mRNA'ların cDNAlarının taşıyan ikili plazmid vektörler taşıyan Agrobacterium tumefaciens bir hücre süspansiyonu 1 ml tek kullanımlık şırınga (iğne olmadan) daha karmaşık bir şey kullanarak hücrelerarası boşluk withina kanadı içine sızmış edilir. Bitki hücrelerine DNA ekleme devri içinde Bu işlem sonucu; T-DNAinsert çekirdeğinde geçici olarak kalır ve daha sonra ev sahibi polimeraz II transkripsiyonu olduğunu, geçici ekspresyonunu. Çıkan mRNA transkript (kep ve polyadenylated) sonra çeviri için sitoplazma ihraç edilmektedir. Inkübasyon yaklaşık 24 ila 48 saat sonra, infiltre yaprakların bölümleri microscopyor biyokimyasal analizler yapılabilir. Agroinfiltration eşzamanlı olarak transfekte edilmesi için hücreler, çok sayıda (yüz binlerce) verir. In vitro encapsidation içinde için, BMV arındırılmış virionlar santrifüjle RNA ve un-ayrışmış virionlar uzaklaştırılması ile devam ayrışma tampon içeren kalsiyum klorür karşı diyaliz tarafından kapsid proteini içine ayrışmış bulunmaktadır. Genom tüketilmiş kapsid proteini alt birimden daha sonra arzu edilen viral genom bileşenleri veya bu tür boya indosiyanin gibi viral olmayan bileşenleri ile yeniden birleştirilen edilir.