急性上皮単純ヘルペスウイルスI型感染の ex vivo器官角膜モデル
Summary
このビデオの記事では、我々は新しいの使用を記述<em> ex vivoで</em急性ヘルペスの>モデルは、ウイルスI型角膜上皮感染を単純。
Abstract
ヘルペス性角膜炎は、単純ヘルペスウイルス1型（HSV-1）に関連付けられている最も深刻な病態の一つである。ヘルペス性角膜炎は、現在、先進国の両方の角膜由来と感染関連失明の主要な原因である。ヘルペス性角膜炎の典型的なプレゼンテーションでは、瘢痕のような恒久的な角膜の病理につながる間伐、不透明度1、角膜上皮の感染、時には深い角膜実質と内皮細胞が含まれています。
角膜のHSV-1感染は、伝統的に実験モデルの2つのタイプに研究されている。角膜上皮細胞の単層培養をペトリ皿に感染されているin vitroモデルで 、シンプルさ、再現性の高いレベル、高速実験、比較的低コストを提供しています。一方、このようなウサギやマウスなどの動物が角膜に直接接種されているin vivoモデルで 、高度に洗練された生理を提供していますシステムが、コストが高く、長い実験では、必要に応じて動物の世話、及び変動の大きい程度を持っています。
このビデオの記事では、我々 のin vitroおよび in vivoモデルの両方の長所を組み合わせた角膜上皮のHSV-1感染症の新しいex vivoでモデルの詳細なデモンストレーションを提供する。 ex vivoのモデルはorganotypically培養で維持とHSV-1に感染した無傷の角膜を利用しています。 ex vivoでのモデルの使用は非常に生理的に基づく結論を可能にし、まだそれはむしろ安価で、in vitroモデルに匹敵する時間のコミットメントを必要とします。
Protocol
Discussion
このビデオの記事では 、ex vivo モデルにおける急性角膜上皮HSV-1感染を研究するための方法を説明します。それは細胞培養結果の生理学的に正確な検証を行うことができ、それにより、行わなければならない動物実験の量を制限しているので、このモデルでは、in vivo モデルにおいて、in vitroおよびin間の有用な足がかりです。また、ex vivoのモデルは、無傷の<…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
デラウェア州谷のライオンズ·アイバンクのサポートは、この仕事のための非常に貴重でした。 ICP8に対する一次マウスモノクローナル抗体は、デビッドKnipe（ハーバード大学医学部）から親切な贈り物だった。我々はまた、役立つ議論や専門知識のために博士スティーブンジェニングス（医学ドレクセル大学カレッジ）とピーターLaibson（ウィルズ眼研究所）に感謝。
Materials
| Reagents/Supplies | Company | Catalogue # |
| Minimum Essential Medium (MEM) | Mediatech | 10-010-CV |
| Non-Essential Amino Acids (100x solution) | Mediatech | 25-025-CI |
| L-Glutamine | Mediatech | 25-005-CI |
| Penicillin G Sodium Salt | Sigma | P3032 |
| Streptomycin Sulfate Salt | Sigma | S9137 |
| Agarose | Invitrogen | 15510-027 |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Prepared in lab | N/A |
| Trypsin EDTA (1x) | Mediatech | 25-053-CI |
| DNeasy Blood & Tissue Kit | QIAGEN | 69504 |
| RNeasy Mini Kit | QIAGEN | 74104 |
| Laemmli Buffer | Prepared in lab | N/A |
| Optimal Cutting Temperature (OCT) Compound | Tissue-Tek | 4583 |
| Whole Rabbit Eyes (Young) | Pel-Freez | 41211-2 |
| Human Corneas and Whole Eyes | Local Eye Bank | N/A |
| 12 Well Porcelain Spot Plate | Avogadro’s Lab Supply | 1877 |
| 35 mm Tissue Culture Dish | Falcon | 353001 |
| 6 Well Cell Culture Plate | Greiner Bio-One | 657160 |
| Cryomold Intermediate | Tissue-Tek | 4566 |
Riferimenti
- Kaye, S., Choudhary, A. Herpes simplex keratitis. Prog. Retin. Eye Res. 25, 355-380 (2006).
- Holmberg, B. J. Enucleation of exotic pets. Journal of Exotic Pet Medicine. 16, 88-94 (2007).
- Remeijer, L., Osterhaus, A., Verjans, G. Human herpes simplex virus keratitis: the pathogenesis revisited. Ocul. Immunol. Inflamm. 12, 255-285 (2004).
- Foreman, D. M., Pancholi, S., Jarvis-Evans, J., McLeod, D., Boulton, M. E. A simple organ culture model for assessing the effects of growth factors on corneal re-epithelialization. Exp. Eye Res. 62, 555-564 (1996).
- Xu, K. P., Li, X. F., Yu, F. S. Corneal organ culture model for assessing epithelial responses to surfactants. Toxicol. Sci. 58, 306-314 (2000).
- Klausner, E. A., Peer, D., Chapman, R. L., Multack, R. F., Andurkar, S. V. Corneal gene therapy. J. Control Release. 124, 107-133 (2007).
- Halford, W. P. ICP0 antagonizes Stat 1-dependent repression of herpes simplex virus: implications for the regulation of viral latency. Virol. J. 3, 44 (2006).
- Bhattacharjee, P. S. Effective treatment of ocular HSK with a human apolipoprotein E mimetic peptide in a mouse eye model. Invest Ophthalmol Vis. Sci. 49, 4263-4268 (2008).
- Novitskaya, E. S. Difficulties imaging herpes simplex keratitis with fluorescein isothiocynate-labeled anti-HSV-1 antibodies in an ex vivo model. Cornea. 28, 421-425 (2009).
- Sharma, A., Shimeld, C. In vivo immunofluorescence to diagnose herpes simplex virus keratitis in mice. Br. J. Ophthalmol. 81, 785-788 (1997).
