Ex Vivo Modello organotipiche corneale di acuta epiteliali Herpes simplex virus di tipo I Infezione
Summary
In questo video articolo si descrive l'uso di una nuova<em> Ex vivo</emModello> di infezione acuta da herpes simplex virus di tipo I infezione corneale epiteliale.
Abstract
Cheratite da herpes è una delle patologie più gravi associati al virus herpes simplex di tipo 1 (HSV-1). Cheratite Herpes è attualmente la principale causa di cecità sia cornea-derivata e associata ad infezione nel mondo sviluppato. Presentazione tipica di cheratite da herpes include infezione dell'epitelio corneale e talvolta più profonda stroma corneale e endotelio, portando a tali patologie corneali permanenti come cicatrici, assottigliamento e opacità 1.
Corneale HSV-1 infezione è tradizionalmente studiato in due tipi di modelli sperimentali. Il modello in vitro, in cui vengono coltivate infettato monostrati di cellule epiteliali corneali in una capsula di Petri, offre semplicità, elevato livello di replicabilità, esperimenti veloci e costi relativamente bassi. D'altra parte, il modello in vivo, in cui vengono inoculati animali come conigli o topi direttamente nella cornea, offre una fisiologica altamente sofisticatosistema, ma ha costi più elevati, più lunghi esperimenti, per la cura degli animali necessari, e un maggior grado di variabilità.
In questo articolo video, forniamo una dimostrazione dettagliata di un nuovo modello ex vivo di corneale HSV-1, che unisce i punti di forza sia in vitro e in vivo. Il modello ex vivo utilizza cornee intatte organotypically mantenute in coltura e infettati con HSV-1. L'uso del modello ex vivo permette conclusioni altamente fisiologicamente basati, tuttavia è piuttosto costoso e richiede impegno di tempo paragonabile a quella del modello in vitro.
Protocol
Discussion
In questo video articolo si descrive un metodo per lo studio acuta corneale HSV-1 in un modello ex vivo. Questo modello è un passo utile tra la in vitro e in vivo, perché permette di convalida fisiologicamente accurata dei risultati di coltura cellulare e, quindi, limita la quantità di sperimentazione animale che deve essere eseguita. Inoltre, il modello ex vivo offre un'opportunità unica e preziosa per lo studio epiteliale infezione da herpes in intatti cornee umane.…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Il sostegno della Banca degli Occhi Lions del Delaware Valley era preziosa per questo lavoro. Anticorpo di topo primario monoclonale contro ICP8 era un gentile dono del Dr. David Knipe (Harvard Medical School). Ringraziamo anche il dottor Stephen Jennings (Drexel University College of Medicine) e il Dr. Peter Laibson (Wills Eye Institute) per le discussioni utili e competenze.
Materials
| Reagents/Supplies | Company | Catalogue # |
| Minimum Essential Medium (MEM) | Mediatech | 10-010-CV |
| Non-Essential Amino Acids (100x solution) | Mediatech | 25-025-CI |
| L-Glutamine | Mediatech | 25-005-CI |
| Penicillin G Sodium Salt | Sigma | P3032 |
| Streptomycin Sulfate Salt | Sigma | S9137 |
| Agarose | Invitrogen | 15510-027 |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Prepared in lab | N/A |
| Trypsin EDTA (1x) | Mediatech | 25-053-CI |
| DNeasy Blood & Tissue Kit | QIAGEN | 69504 |
| RNeasy Mini Kit | QIAGEN | 74104 |
| Laemmli Buffer | Prepared in lab | N/A |
| Optimal Cutting Temperature (OCT) Compound | Tissue-Tek | 4583 |
| Whole Rabbit Eyes (Young) | Pel-Freez | 41211-2 |
| Human Corneas and Whole Eyes | Local Eye Bank | N/A |
| 12 Well Porcelain Spot Plate | Avogadro’s Lab Supply | 1877 |
| 35 mm Tissue Culture Dish | Falcon | 353001 |
| 6 Well Cell Culture Plate | Greiner Bio-One | 657160 |
| Cryomold Intermediate | Tissue-Tek | 4566 |
Riferimenti
- Kaye, S., Choudhary, A. Herpes simplex keratitis. Prog. Retin. Eye Res. 25, 355-380 (2006).
- Holmberg, B. J. Enucleation of exotic pets. Journal of Exotic Pet Medicine. 16, 88-94 (2007).
- Remeijer, L., Osterhaus, A., Verjans, G. Human herpes simplex virus keratitis: the pathogenesis revisited. Ocul. Immunol. Inflamm. 12, 255-285 (2004).
- Foreman, D. M., Pancholi, S., Jarvis-Evans, J., McLeod, D., Boulton, M. E. A simple organ culture model for assessing the effects of growth factors on corneal re-epithelialization. Exp. Eye Res. 62, 555-564 (1996).
- Xu, K. P., Li, X. F., Yu, F. S. Corneal organ culture model for assessing epithelial responses to surfactants. Toxicol. Sci. 58, 306-314 (2000).
- Klausner, E. A., Peer, D., Chapman, R. L., Multack, R. F., Andurkar, S. V. Corneal gene therapy. J. Control Release. 124, 107-133 (2007).
- Halford, W. P. ICP0 antagonizes Stat 1-dependent repression of herpes simplex virus: implications for the regulation of viral latency. Virol. J. 3, 44 (2006).
- Bhattacharjee, P. S. Effective treatment of ocular HSK with a human apolipoprotein E mimetic peptide in a mouse eye model. Invest Ophthalmol Vis. Sci. 49, 4263-4268 (2008).
- Novitskaya, E. S. Difficulties imaging herpes simplex keratitis with fluorescein isothiocynate-labeled anti-HSV-1 antibodies in an ex vivo model. Cornea. 28, 421-425 (2009).
- Sharma, A., Shimeld, C. In vivo immunofluorescence to diagnose herpes simplex virus keratitis in mice. Br. J. Ophthalmol. 81, 785-788 (1997).
