Femorale cateterismo arterioso e venoso per il campionamento del sangue, Drug Administration e pressione sanguigna consapevole e misure di frequenza cardiaca

1. Prima di partire Procedura chirurgica Nota: Prima di iniziare qualsiasi sperimentazione animale assicurarsi di avere ottenuto le autorizzazioni del caso, tramite il vostro istituto / organizzazione. Come per tutte le operazioni chirurgiche la sopravvivenza, assicurarsi che l'intervento chirurgico viene eseguito in condizioni di sterilità e la antidolorifici e antibiotici appropriati necessari vengono utilizzati per un esito positivo. Prima di iniziare la procedura di cateterismo valutare i cateteri da lavaggio con soluzione salina sterile per assicurarsi che siano brevetto. Anestetizzare il topo. Preparare il topo per la procedura chirurgica. Accorciare il pelo dalle regioni chirurgici, che comprendono la parte posteriore del collo (tra le scapole) e la regione interna delle gambe. Utilizzando Betadine e una macchia etanolo al 70% rispettivamente, macchia le regioni rasata chirurgico a partire dal centro verso l'esterno e facendo una scansione circolare. Ripeterequesto 3 volte per ogni regione, terminando con una pulizia finale con etanolo al 70%. Posizionare l'animale su una superficie e telini sterili luogo sterile su aree chirurgiche. (L'utilizzo di Press-n-Seal è un drappeggio ideale chirurgica che consente al ricercatore di monitorare l'animale durante tutta la procedura.) Garantire tutti gli strumenti chirurgici per la procedura chirurgica sono stati sterilizzati. 2. Preparazione delle aree chirurgiche per il posizionamento del catetere Con il topo che prona (sulla pancia), fanno circa un pollice e mezzo (12 mm) incisione orizzontale sulla parte posteriore del collo a livello delle scapole con le forbici o un bisturi, poi smussato dissezionare un sottocutaneo "tasca" in la parte posteriore delle dimensioni di un quarto. Questo verrà utilizzato come area di inserire una piccola quantità di tubi che compensare la crescita degli animali e / o movimento, cioè in modo che il catetere non viene tirato su, e quindi rimosso dal arteria è stato postod pollici (In alternativa questa fase può essere eseguita immediatamente prima tunnel del catetere.) Posizionare il topo sul dorso (posizione supina) e fare un'incisione nella zona inguinale [circa ½ pollice (12 mm) incisione lungo l'angolo naturale della gamba posteriore. Blunt sezionare per separare il tessuto connettivo (Figura 1) (può usare forbici a punta smussata, hemostats, bastoncini di cotone, ecc) (in genere tenendo le forbici a punta e / o tamponi di cotone con un angolo di 45 gradi questo garantisce la localizzazione più facile della regione di interesse) fino a quando l'arteria femorale e la vena sono esposti. La vena è rosso di colore scuro e l'arteria è più chiara e più luminosa la vena. Il nervo che corre lungo l'arteria è biancastra di tono. Blunt sezionare nella regione gamba per fare una piccola regione aperta sotto la pelle (Pocket IE, circa le dimensioni di un quarto) lungo la parte interna della gamba per il posizionamento di una piccola sezione del catheter (di nuovo per tener conto del movimento degli animali e la crescita dell'animale se posizionamento cronica). Posizionare il divaricatori nella zona incisione in modo che si può pienamente vista l'arteria e vena. Utilizzando punta fine pinze separare delicatamente il nervo (colore biancastro) che è lungo l'arteria femorale di distanza dalla arteria e vena. (Figura 2) Fare attenzione a non tagliare o danneggiare il nervo. Separare l'arteria e la vena come una singola unità, cercando di esporre un sezione di lunghezza circa ¼ di pollice (5-7 mm) di arteria / vena. Ripetere il processo di separazione della vena dall'arteria. Mantenete il vostro strumenti chirurgici (pinze punta cioè bene) perpendicolare ai vasi e separare i vasi in parallelo. Questo aiuta a evitare strappi, pizzicore o danneggiare i vasi. Inserendo il forcipe punta fine delicatamente tra l'arteria e la vena da sotto e lentamente aprendo la pinza e ripetere questo, si lentamente separare le navi. Nota: se si fa strappare o osservare alcunesanguinamento utilizzare un tampone sterile di cotone e / o 2 x 2 garze e pressione posto sulla zona fino a quando l'emorragia si è fermata, quindi continuare con l'intervento chirurgico. 3. Tunneling il catetere Soluzione salina sterile imbevuta posto 2 x 2 garza sopra l'incisione e trasformare l'animale al suo stomaco. Posizionare il Rochester Pean pinze (pinze lungo rettilineo) nella incisione sul retro che è stato fatto in precedenza e guida il forcipe per via sottocutanea lungo la schiena al livello dei fianchi [garantire le punte delle hemostats sono rivolta verso l'alto, non (verso la colonna vertebrale ) per evitare lesioni al midollo spinale]. Approssimativamente alla regione dell'anca hemostat girare la punta verso l'incisione che è stato fatto nella regione delle gambe e spingere la punta del hemostats fuori l'incisione gamba preparato. Afferrare con delicatezza la fine dei cateteri (non la fine che verrà inserito in arteria / vena) con la pinza e tirare delicatamente il catetere attraverso la cavità che è stato fattoe, infine, fuori l'incisione del collo. Posizionare la punta smussata appropriata siringa riempita con 20 U / ml Eparina / salino alla fine del rispettivo cateteri e riempire i cateteri (assicurarsi che non vi siano bolle d'aria) con il eparinizzata / salina. Ancora una volta controllare che i cateteri sono brevetti e nessun danno è giunta alla cateteri. Lasciare le siringhe attaccate alla fine delle linee catetere per garantire che non l'aria è in grado di entrare in linee catetere e ruotare il topo sul dorso, ancora una volta. 4. Inserimento del catetere nella vena femorale e delle arterie (Figura 3) Posizionare un pezzo piegato di 4,0 sterili seta / filo sotto la vena femorale e poi tagliare la seta alla fine piegato. Ci saranno ora due pezzi di seta sotto la vena. Oppure, in alternativa, posto 2 pezzi di 4,0 seta sotto la vena singolarmente. Separare la seta che vi posto sotto la vena, un pezzo verso la gamba (distale) e l'altro verso il corpo. Tcioè una legatura allentata sul lato più vicino al corpo, quindi utilizzando hemostats piccolo, afferrare e tirare la seta ha insegnato, ma non stringere il nodo. Tirare l'altro pezzo di seta, per quanto possibile verso la gamba (distale) e legare questo in un nodo triplo, afferrare la seta con hemostats piccole e tirare insegnato. Questo metodo permetterà la vena di riempirsi di sangue, rendendo più semplice per rendere il l'incisione che è richiesta per l'inserimento del catetere (punto 4). Luogo 1-2 gocce di lidocaina sulla vena. Utilizzando il micro-dissezione forbici Vanna, fare una piccola incisione nella vena circa ¼ attraverso e con un angolo di 45 gradi. Luogo punta fine pinze (45 pinze) nella incisione e l'utilizzo di un altro paio di pinze, fare avanzare il catetere nella vena. Aprire delicatamente il forcipe che vengono inseriti nella vena, in modo da permettere al ricercatore di inserire delicatamente il catetere venoso sotto la pinza e nella vena. Quando il catetere è completamente inserito (approx. 6-7 cm) (quando si effettua il catetere è un marchio posto sul catetere per aiutare il chirurgo a identificare quando il catetere è completamente inserito) (questo pone il catetere venoso nella vena cava addominale), stringere la legatura anteriore intorno alla vena e catetere, un nodo triplo (in modo che non si occlude la vena). Utilizzare la sutura di seta vicino alla gamba (legatura posteriore) per fissare di nuovo il catetere (nodo tripla) e assicurare il posizionamento. Lentamente tira indietro la siringa fino a quando c'è un po 'di sangue visibile nel catetere, che aiuta a garantire che i nodi di sutura non siano troppo strette e che il catetere è funzionale. Dopo il controllo, spingere il pistone fino a quando il sangue non è più visibile nel catetere. Nota: è possibile inserire 2 cateteri nella vena femorale, se necessario. Ripetere i passaggi 9-13 per posizionare un catetere dell'arteria femorale con le seguenti eccezioni: Cravatta di seta più vicino alla gamba (posteriore) con un nodo triplo e tirare taught prima di legare la legatura allentata vicino al corpo (anteriore) prima di effettuare l'incisione per il posizionamento del catetere. Questo permetterà l'arteria di riempirsi di sangue rendendo più facile da tagliare. Garantire la sutura prossimale viene tirato insegnato ad occludere l'arteria prima del taglio l'arteria. Ciò eviterà la perdita di sangue quando il taglio è fatto. Inserire il catetere arterioso di circa 5 cm dal arteria femorale (questo pone il catetere in aorta addominale). Il fissaggio del catetere con la sutura, assicurarsi che la sutura non è troppo stretto e occlusione del catetere. 5. Chirurgico Wrap-up Fai un centesimo al quarto ciclo di dimensioni di cateteri e posto sulla parte interna della gamba (il ciclo dovrebbe andare bene nella zona che è stato smussato sezionato in precedenza). Dopo aver posizionato due cateteri, li sicuro con 1-2 punti su 5,0 sutura chirurgica nello strato muscolare. Chiudere l'incisione con 4.0 Ethilon con i continui sutures. Girare il ratto sulla sua pancia e fare un altro ciclo nella cateteri circa le dimensioni di un quarto e mettere in tasca sezionato nella parte posteriore. Chiudere l'incisione con la sutura. Utilizzando una goccia di vetbond, fissare il catetere nella schiena. Bloccare il cateteri vicino l'incisione posteriore con hemostats imbottito e rimuovere le siringhe dalle estremità. Montare il topo con una pastoia di tipo giacca, il cappello cateteri (per mantenere il blocco eparina), e rimuovere il hemostats imbottita. – Per il mantenimento a lungo termine sostituzione del catetere soluzione fisiologica con 20 U / ml di eparina / salina. 6. Manutenzione di catetere (guanti sterili devono essere indossati durante la procedura) Bloccare il catetere con una pinza imbottiti. Togliere il tappo del catetere. Inserire una siringa con soluzione di punta smussata agganciare il catetere. Sbloccare le pinze. Riempire il catetere con la soluzione di bloccaggio (volume è pre-deterioramentormined, in genere 0,3 ml). Bloccare il catetere mentre lavaggio per evitare il riflusso di sangue nella punta del catetere e togliere la siringa. Sostituire il tappo del catetere. Sbloccare la pinza e spingere delicatamente la spina in un po 'per garantire che non è sangue nella punta del catetere. 7. Sangue di campionamento (guanti sterili devono essere indossati durante la procedura) Bloccare il catetere con una pinza imbottiti. Togliere il tappo del catetere. Estrarre lentamente la soluzione di blocco usando una siringa con punta smussata e scartare. Attaccare siringa di campionamento al catetere e ritirare lentamente il campione. Bloccare il catetere con una pinza imbottito e posto una siringa con soluzione di agganciare il catetere e ri-riempire il catetere con la soluzione di bloccaggio. Bloccare il catetere, mentre ri-riempire il catetere con la soluzione. Re-inserire la spina del catetere. Rimuovere la pinza imbottito e spingere delicatamente t si collega un po 'più. 8. Infusione di droga Bloccare il catetere con una pinza imbottiti. Togliere il tappo del catetere. Estrarre lentamente la soluzione di blocco usando una siringa con punta smussata e scartare. Attaccare siringa riempita di droga al catetere e infondere la sostanza in animali. si può usare un rubinetto a 3 vie e un intermedio se iniezioni multiple sono necessari, richiedendo così l'infusione di liquidi in meno l'animale. si può anche allegare una costante pompa a siringa per infusione con un filtro sterile per infusioni continue. Fascetta con una pinza imbottito e posto una siringa con soluzione di agganciare il catetere e ri-riempire il catetere con la soluzione di bloccaggio. Bloccare il catetere, mentre ri-riempire il catetere con la soluzione. Re-inserire la spina del catetere. Rimuovere la pinza imbottito e spingere delicatamente la spina in un po 'più. e "> 9. pressione arteriosa e frequenza di campionamento Cuore Bloccare il catetere arterioso imbottito con una pinza e togliere il tappo del catetere. Fissare la linea arteriosa al trasduttore di pressione. Seguire le istruzioni del produttore per l'utilizzo del software per la raccolta della pressione sanguigna. Al termine del periodo di monitoraggio della pressione arteriosa, utilizzando pinze imbottito bloccare il catetere e staccare dal trasduttore. Lavare il catetere con la soluzione di blocco e sostituire il tappo del catetere come descritto sopra. 10. Rappresentante Risultati Un rappresentante di misurare la pressione arteriosa è stata presa da un animale cosciente muoversi liberamente ed è presentato in figura 4. Fenilefrina (3 ug / kg, iv), un alfa 1 agonista del recettore adrenergico, è stato somministrato nella linea vena femorale per aumentare la pressione sanguigna, e contemporaneamente la misurazione della pressione arteriosa dalla linea arteriosa femorale. Fentolamina (4 mg / kg, iv),uno non selettivi alfa-adrenergici antagonista, è stato poi somministrato per abbassare la pressione sanguigna. Figura 1. Blunt dissezione dei tessuti. Con il topo sulla schiena, avrete fatto circa un pollice e mezzo (12 mm), incisione su l'angolo della gamba posteriori e utilizzando forbici o hemostats si smussato sezionare il tessuto connettivo per esporre l'arteria e la vena femorale. Figura 2. Separazione di arteria femorale e la vena da tessuto connettivo. Figura 3. Posizionamento del catetere. Vanna utilizzando micro-dissezione forbici posto una piccola incisione di circa ¼ della strada attraverso l'imbarcazione ad una angolo di 45 gradi (sopra) e posto a punta fine pinze in °e incisione e l'utilizzo di un altro paio di pinze alimentare il catetere nel vaso (al centro). Infine, al termine del posizionamento del catetere sutura del catetere al posto (in basso). Figura 4. Rappresentante misurare la pressione prelevato da un animale cosciente liberamente in movimento.