Cytosolic CA의 측정 2 + 절연 수축성 Lymphatics에
Summary
우리는 cytosolic CA를 평가하는 접근 방법을 소개합니다<sup> 2 +</supCA를 공부 격리 lymphatics에> 집중<sup> 2 +</sup> 종속 및 CA<sup> 2 +</sup림프 평활근의 수축> – sensitizing 메커니즘.
Abstract
림프 혈관은 액체 항상성 유지 중앙 순환에 lipids를 제공하고, 잠재적으로 해로운 항원에 대한 감시 시스템 역할, 점막 면역과 적응 면역 반응 1 최적화 다기능 교통 시스템을 구성. 림프는 맹인 종단 초기 lymphatics를 입력하고, 다음 큰 수집 lymphatics에서 압력 구배에 대한 수송이다 중간 유체로부터 형성됩니다. 각 수집 림프는 역류를 방지 뾰족한 끝이 둘있는 밸브로 구분 lymphangions라는 세그먼트의 일련의 구성됩니다. 각 lymphangion는 중앙 혈액 순환이 방향 압력 구배에 대한 림프을 향한 추진력을 얻습니다 수축성 사이클을 가지고 있습니다. 이 phasic 수축성 패턴은 수축기 및 diastolic 단계와 심장주기에 유사하고, 낮은 수축 주파수 4. 또한, 림프 평활근은 음색을 생성하고 myogenic 수축과 팽창을 표시 I각각 luminal 압력 증가와 감소, 5 N 응답. lymphatics의 phasic와 토닉 수축성을 모두 지원하는 분자 메커니즘의 하이브리드 따라서 제안하고 있습니다.
평활근의 수축은 일반적으로 cytosolic 칼슘 2 + 농도 규제 ([칼슘 2 +] I) 칼슘 2 플러스 감성 +, 세포 6 주변 환경의 변화에 대한 응답으로 수축성 요소. [칼슘 2 +] 제가 + 플라즈마 막 리간드 또는 전압 문이 칼슘 2 + 채널과 + 내부 상점에서 칼슘 2의 릴리스와 이해를 통해 칼슘 2의 운동의 조합에 의해 결정됩니다. Cytosolic 칼슘 2 + calmodulin에 바인딩 및 마이 오신 조명 체인으로 효소를 활성화 (MLC) 차례로 MLC는 굴지 – 마이 오신 – 중재 수축 8 선도 phosphorylates 키나제 (MLCK). 그러나, 칼슘이 경로의 감도 <sup> 2 +는 MLC 인산 가수 분해 효소 (MLCP) 9 조정할 수 있습니다. MLCP 활동 Rho 키나제 (바위)과 마이 오신의 인산 가수 분해 효소 억제제 단백질 CPI – 17에 의해 규제됩니다.
여기, 우리는 칼슘 2 + – 의존과 칼슘이 림프 평활근의 수축의 + – sensitizing 메커니즘을 연구하기 위해 절연, perfused lymphatics에서 시간이 지남에 따라 [+ 칼슘 2] 나는 변화를 평가하는 방법을 제시한다. 절연 쥐 mesenteric 수집 lymphatics를 사용하여 우리는 [+ 칼슘 2] I 및 수축성 활동에 스트레칭 유발 변화를 공부했습니다. 격리된 림프 모델은 압력, 유량 및 욕조 솔루션의 화학 성분이 밀접하게 제어할 수있는 장점을 제공합니다. [칼슘 2 +] 제가 ratiometric, CA 2 + 바인딩 염색 Fura – 2 lymphatics 로딩에 의해 결정되었다. 이러한 연구는 phasic 조절 다른 분자 메커니즘을 연구의 광범위한 문제에 대한 새로운 접근 방법을 제공합니다림프 평활근의 수축 토닉 대 수축.
Protocol
Discussion
방법의 소설 조합은 림프 혈관의 펌핑 본질을 연구하기 위해 고용되었다. 동시에 변화 측정 기능 [칼슘 2 +] i와 펌핑 lymphatics의 직경은 칼슘 2의 상대적인 기여도 + 종속 및 CA 2 림프 수축성주기를 지배하는 전체 메커니즘에 + – sensitizing 신호 경로. 연구를 허용합니다
림프 수축성주기 톤 이상 겹쳐 phasic 수축으로 구성되어 있습…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Materials
| 1. Ringer 5x Stock | |||
| Company | Catalog Number | Amount | |
| Sodium Chloride | EMD | SX0420-3 | 35 g |
| Potassium Chloride | J.T. Baker | 3040 | 1.75 g |
| Calcium Chloride | Sigma | C-3881 | 1.47 g |
| Magnesium Sulfate | Sigma | M-9397 | 1.44 g |
| Sterile Filtered Water | N/A | N/A | Bring to 1 L |
| Sterile filter into autoclaved bottles and stores at 4 °C | |||
| 2. MOPS buffer | |||
| Chemical | Company | Catalog Number | Amount |
| MOPS | Sigma | M3183 | 125.6 g |
| Sterile Filtered Water | N/A | N/A | Bring to 1 L |
| Sterile filter into autoclaved bottles and stores at 4 °C | |||
| 3. Albumin Physiological Salt Solution (APSS) | |||
| Chemical | Company | Catalog Number | Amount |
| Ringer stock (5x) | N/A | N/A | 200 mL |
| Mops Buffer | N/A | N/A | 5 mL |
| Sodium Phosphate | Sigma | S-9638 | 0.168 g |
| Sodium Pyruvate | Sigma | P5280 | 0.22 g |
| EDTA sodium salt | Sigma | ED2SS | 0.0074 g |
| Glucose | Sigma | G7528 | 0.901 g |
| Albumin, Bovine | USB | 10856 | 10 g |
| Sterile Filtered Water | N/A | N/A | Bring to 1 L |
| Adjust pH to 7.4 at 37° C, then sterile filter into autoclaved bottles and store at 4 °C. |
Table 1. Specific Reagents Used. Store all at 4 °C.
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