Tillämpning av en mus knyts ihop Peyer s Patch Intestinal Loop-analys för att utvärdera Bakteriell Upptag av M celler

Insidan av våra tarmar är bebodda med enorma antal bakteriefloran. Den slemhinna i mag-tarmkanalen är ständigt utsatt för dem och ibland för patogener. Tarmen-associerad lymfvävnad (GALT) spelar en viktig roll för induktion av slemhinnor immunsvaret mot dessa mikrober ^{1, 2.} Att inleda slemhinnor immunsvar, måste slemhinnor antigener transporteras från tarmen lumen över epiteliala barriären till organiserad lymfoida folliklar som Peyers plack. Detta antigen transcytos medieras av specialiserade epitelceller M celler ^{3, 4.} M-celler är atypiska epitelceller som aktivt phagocytose makromolekyler och mikrober. Till skillnad från dendritiska celler (DC) och makrofager, som riktar antigener till lysosomer för nedbrytning, M celler transcytose främst internaliseras antigener. Denna kraftfulla makromolekulära transcytos genom M celler levererar antigen till den underliggande organiserade lymfoida folliklar end tros vara nödvändigt för att initiera antigenspecifika slemhinnor immunsvar. Men de molekylära mekanismer som främjar detta antigen upptag av M celler är i stort sett okända. Vi har tidigare rapporterat att glykoprotein 2 (GP2), särskilt uttryckt på den apikala plasmamembranet av M celler bland enterocyterna, fungerar som en transcytotic receptor för en delmängd av kommensala och patogena enterobakterier, inklusive Escherichia coli och Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. Typhimurium ), genom att erkänna FimH, en komponent av typ I Pili på bakteriens yttre membran ^5. Här presenterar vi en metod för tillämpning av en mus Peyer är plåster intestinal loop-analys för att utvärdera bakteriell upptag av M celler. Denna metod är en förbättrad version av musen tarmen slingan test tidigare beskrivits ^{6, 7.} Den förbättrade punkter är följande: 1. Isofluran användes som ett bedövningsmedel. 2. Ca 1 cm knyts ihop intestinal slinga inklusivening Peyer är patch bildades. 3. Bakterier tas upp av M cellerna fluorescerande av fluorescens märkning reagens eller genom att överuttryck av fluorescerande proteinet som grönt fluorescerande protein (GFP). 4. M celler i hårsäcken-associerade epitel täcker Peyer är plåster upptäcktes av hel-mount immunostainig med anti GP2 antikropp. 5. Fluorescerande bakterier transcytos av M celler observerades av konfokala mikroskopisk analys. Musen Peyer är plåster tarm loop-analysen kunde leverera svaret vilken typ av kommensala eller sjukdomsframkallande bakterier transcytosed av M celler, och kan leda oss att förstå den molekylära mekanismen för hur man kan stimulera slemhinnorna immunförsvaret genom M celler.