Anvendelse av en Mouse Ligated Peyer er Patch Intestinal Loop Assay å evaluere Bakteriell Opptak av M celler

Innsiden av tarmen vår er bebodd med enorme antall commensal bakterier. Mucosal overflaten av gastrointestinaltraktus er kontinuerlig utsatt for dem og noen ganger til patogener. Tarmen-assosiert lymfoid vev (Galt) spiller en nøkkelrolle for induksjon av mucosal immunresponsen på disse mikrobene ^{1, 2.} For å starte mucosal immunrespons, må mucosal antigener skal transporteres fra tarmen lumen over epiteliale barriere i organiserte lymfoide follikler som Peyer er patcher. Dette antigen transcytosis er mediert av spesialiserte epitelceller M celler ^{3, 4.} M celler er atypiske epiteliale celler som aktivt phagocytose makromolekyler og mikrober. I motsetning til dendrittiske celler (DCS) og makrofager som mål antigener til lysosomer for nedbrytning, M celler hovedsakelig transcytose den internaliserte antigener. Dette livskraftige macromolecular transcytosis gjennom M celler leverer antigen til den underliggende organiserte lymfoide follikler end antas å være avgjørende for å initiere antigen-spesifikke slimhinnene immunrespons. Men de molekylære mekanismene som fremmer dette antigen opptak av M celler er i stor grad ukjent. Vi har tidligere rapportert at glykoprotein 2 (GP2), spesifikt uttrykt på den apikale plasma membran av M celler blant enterocytter, fungerer som et transcytotic reseptor for en undergruppe av commensal og patogene enterobacteria, inkludert Escherichia coli og Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. Typhimurium ), ved å anerkjenne FimH, en komponent av type I pili på bakteriens ytre membran ^5. Her presenterer vi en metode for anvendelse av en mus Peyer er patch intestinal sløyfe analysen å vurdere bakteriell opptak av M celler. Denne metoden er en forbedret versjon av musa intestinal sløyfe analysen tidligere beskrevet ^{6, 7.} Den forbedrede punktene er som følger: 1. Isofluran ble brukt som anestesimiddel. 2. Ca 1 cm ligated intestinal sløyfe inkluing Peyer sin patch ble satt opp. 3. Bakterier tatt opp av M celler ble fluorescensmerkede av fluorescens merking reagens eller ved overekspresjon fluorescerende protein som grønn fluorescerende protein (GFP). Fire. M cellene i hårsekken-assosiert epitel dekker Peyer sin lapp ble oppdaget av hel-mount immunostainig med anti GP2 antistoff. 5. Fluorescent bakteriell transcytosis av M celler ble observert av confocal mikroskopisk analyse. Musen Peyer er patch intestinal sløyfe analysen kunne levere svaret hva slags commensal eller sykdomsfremkallende bakterier transcytosed av M celler, og kan lede oss til å forstå den molekylære mekanismen for hvordan å stimulere slimhinnene immunforsvaret gjennom M celler.