Voltaj-kapılı potasyum Kanal mRNA gösterilmeden Tek hücreli RT-PCR teknikleri kullanarak Nigral Nöronlar
Summary
Nöronlar ilk elektrofizyolojik karakterizedir. Ardından kaydedilen nöron sitoplazma aspire ve nörotransmitter sentezi enzimler, iyon kanalları ve reseptörler mRNA'ların ifade algılamak için ters transkripsiyon-PCR analizi tabi.
Abstract
Memeli santral sinir sistemi, nöronların farklı moleküler ve fonksiyonel özellikleri ile farklı türleri birbirlerine ayırmak için zor ve aynı zamanda kolaylıkla morfolojisi tarafından belirlenen iç içe. Böylece, belirli bir nöron türü gen ekspresyonu analiz etmek genellikle zordur. Burada önemli nigra nöronlarının farklı tipte profil mRNA tek hücreli ters transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu (scRT PCR) ile tam hücreli yama kelepçe kayıt teknikleri birleştiren bir prosedür belge. Elektrofizyolojik teknikleri ilk bireysel nöronların nörofizyolojik ve fonksiyonel özellikleri kaydetmek için kullanılır. Sonra, elektrofizyolojik karakterize tek nigral nöron sitoplazma aspire ve nörotransmitter sentezi enzimler, reseptörler ve iyon kanalları için mRNA profillerini elde etmek için scRT-PCR analizine tabi tutulur. Yüksek seçicilik ve duyarlılık immünohistokimya, uygun antikor ya da protein ekspresyon seviyesi düşük eksikliği nedeniyle kullanılamaz zaman bu yöntem özellikle yararlı olun. Bu yöntem aynı zamanda diğer beyin bölgeleri nöronların için geçerli.
Protocol
Discussion
ScRT-PCR ile beyin dilim yama kelepçe kayıt kombinasyonu burada iyon kanalları, reseptörleri ve ayrı ayrı karakterize nöronlar nörotransmitter sentezi için önemli enzimler için mRNA ekspresyon profilleri araştırmak için mükemmel bir yöntem sağlamak gösterdi. (Zhou ve ark 2009. Surmeier ve ark 1996), söz konusu proteinin tespit edilir ve düşük ekspresyon seviyesi ve / veya uygun antikor eksikliği nedeniyle immünohistokimya gibi diğer yöntemleri kullanarak lokalize edilemez zaman yararlıdır. Sc…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma NIH hibe R01DA021194 ve R01NS058850 tarafından desteklenmiştir.
Materials
Table 1. Key reagents and equipment
Table 2. Primer pairs for rat neuronal Kv3 channel, tyrosine hydroxylase (TH) and glutamic acid decarboxylase 1 (GAD1) mRNAs for scRT-PCR
Riferimenti
- J, . Tuning pacemaker frequency of individual dopaminergic neurons by Kv4.3L and Kchip3.1 transcription. EMBO J. 20, 5715-5724 (2001).
- Surmeier, D. J., Song, W. J., Yan, Z. Coordinated expression of dopamine receptors in neostriatal medium spiny neurons. J. Neurosci. 16, 6579-6591 (1996).
- Zhou, F. W., Matta, S. G., Zhou, F. -. M. Constitutively active TRPC3 channels regulate basal ganglia output neurons. J. Neurosci. 28, 473-482 (2008).
- Zhou, F. W., Jin, Y., Matta, S. G., Xu, M., Zhou, F. -. M. An ultra-short dopamine pathway regulates basal ganglia output neurons. J. Neurosci. 29, 10424-10435 (2009).
- Ding, S., Matta, S. G., Zhou, F. -. M. Kv3-like potassium channels are required for sustained high-frequency firing in Basal Ganglia output neurons. J. Neurophysiol. 105, 554-570 (2011).
- Zhou, F. W., Xu, J. J., Zhao, Y., Ledoux, M. S., Zhou, F. -. M. Opposite functions of histamine H1 and H2 receptors and H3 receptors in substantia nigra pars reticulata. J. Neurophysiol. 96, 1581-1591 (2006).
