在使用单细胞RT - PCR技术的黑质神经元电压门控钾通道mRNA表达分析
Summary
electrophysiologically神经元是第一个特点。然后从所记录的神经元的胞浆吸气和遭受反转录- PCR分析，检测神经递质的合成酶，离子通道和受体的mRNA表达。
Abstract
在哺乳动物中枢神经系统中，不同类型的神经元具有不同的分子和功能特点是混杂着对方，难以分开，也不易确定其形态。因此，它往往是很难在一个特定的神经元类型的基因表达分析。在这里，我们记录全细胞膜片钳记录技术，它结合了单细胞逆转录聚合酶链反应（SCRT – PCR）分析mRNA的表达在大量的黑质神经元的不同类型的程序。电生理技术最初是用来记录单个神经元的神经生理学和功能特性。然后吸气，单electrophysiologically特点的黑质神经元的胞浆SCRT – PCR分析，以获取神经递质的合成酶，受体，离子通道的mRNA的表达谱。这种方法特别有用时，不能用免疫组织化学由于缺乏合适的抗体或蛋白质表达水平低的高选择性和灵敏度。这种方法也适用于其他脑区的神经元。
Protocol
Discussion
修补脑片钳记录SCRT – PCR技术相结合，我们这里展示提供了一个极好的方法来研究离子通道，受体和个别特征的神经元的神经递质合成的关键酶的mRNA表达谱。这是特别有用的，当问题中的蛋白质不能被检测和本地化使用其他方法，如免疫组化由于表达水平低和/或缺乏合适的抗体（Surmeier等，1996;。Zhou等2009）。 SCRT – PCR的高灵敏度和选择性，允许检测低丰度的mRNA（Surmeier等，1996年）。此外，这个方?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是支持由NIH资助R01DA021194和R01NS058850。
Materials
Table 1. Key reagents and equipment
Table 2. Primer pairs for rat neuronal Kv3 channel, tyrosine hydroxylase (TH) and glutamic acid decarboxylase 1 (GAD1) mRNAs for scRT-PCR
Riferimenti
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