التنميط الجهد بوابات مرنا قناة البوتاسيوم التعبير في الخلايا العصبية Nigral باستخدام خلية واحدة RT - PCR تقنيات
Summary
وتتميز الخلايا العصبية electrophysiologically first. ثم يستنشق السيتوبلازم من الخلايا العصبية المسجلة وتعرض لعكس النسخ PCR تحليل للكشف عن التعبير عن mRNAs للأنزيمات التوليف العصبي ، وقنوات ايون ، والمستقبلات.
Abstract
الثدييات في النظام العصبي المركزي ، وتختلط أنواع مختلفة من الخلايا العصبية مع مختلف الخصائص الجزيئية والوظيفية مع بعضها صعب ، وغيرها ، وكذلك لفصل لم يتم التعرف بسهولة عن طريق التشكل بهم. وهكذا ، فإنه غالبا ما يكون من الصعب تحليل التعبير الجيني في الخلايا العصبية من نوع معين. نحن هنا وثيقة إجراء من شأنه أن يجمع بين خلية كاملة تقنيات تسجيل التصحيح مع المشبك وحيدة الخلية تفاعل البلمرة عكس النسخ (scRT – PCR) للتعبير عن التعريف مرنا في أنواع مختلفة من الخلايا العصبية في أسود كبير. واستخدم لأول مرة تقنيات الكهربية لتسجيل خصائص العصبية والوظيفية للخلايا العصبية الفردية. إذن ، هو أن يستنشق السيتوبلازم من الخلايا العصبية واحدة تتميز nigral electrophysiologically وتعرض لscRT – PCR تحليل للحصول على ملامح التعبير مرنا للأنزيمات التوليف العصبي ، والمستقبلات ، وقنوات أيون. انتقائية عالية وحساسية تجعل هذه الطريقة مفيدة بشكل خاص عندما لا يمكن المناعية يمكن استخدامها نظرا لعدم وجود أجسام مضادة مناسبة أو انخفاض مستوى التعبير من البروتين. هذا الأسلوب ينطبق أيضا على الخلايا العصبية في مناطق أخرى من الدماغ.
Protocol
Discussion
مزيج من تسجيل المشبك التصحيح في الدماغ مع شريحة scRT – PCR أظهرت نقدم هنا وسيلة ممتازة للتحقيق في ملامح التعبير مرنا للقنوات ايون ، والمستقبلات ، والإنزيمات الرئيسية لتخليق الموصلات العصبية في الخلايا العصبية تتميز بشكل فردي. هذا مفيد بشكل خاص عندما لا يمكن للبروتين في ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل عن طريق المنح والمعاهد الوطنية للصحة R01DA021194 R01NS058850.
Materials
Table 1. Key reagents and equipment
Table 2. Primer pairs for rat neuronal Kv3 channel, tyrosine hydroxylase (TH) and glutamic acid decarboxylase 1 (GAD1) mRNAs for scRT-PCR
Riferimenti
- J, . Tuning pacemaker frequency of individual dopaminergic neurons by Kv4.3L and Kchip3.1 transcription. EMBO J. 20, 5715-5724 (2001).
- Surmeier, D. J., Song, W. J., Yan, Z. Coordinated expression of dopamine receptors in neostriatal medium spiny neurons. J. Neurosci. 16, 6579-6591 (1996).
- Zhou, F. W., Matta, S. G., Zhou, F. -. M. Constitutively active TRPC3 channels regulate basal ganglia output neurons. J. Neurosci. 28, 473-482 (2008).
- Zhou, F. W., Jin, Y., Matta, S. G., Xu, M., Zhou, F. -. M. An ultra-short dopamine pathway regulates basal ganglia output neurons. J. Neurosci. 29, 10424-10435 (2009).
- Ding, S., Matta, S. G., Zhou, F. -. M. Kv3-like potassium channels are required for sustained high-frequency firing in Basal Ganglia output neurons. J. Neurophysiol. 105, 554-570 (2011).
- Zhou, F. W., Xu, J. J., Zhao, Y., Ledoux, M. S., Zhou, F. -. M. Opposite functions of histamine H1 and H2 receptors and H3 receptors in substantia nigra pars reticulata. J. Neurophysiol. 96, 1581-1591 (2006).
