Isolamento de células do sistema imunológico funcional cardíaca
Summary
Este método para isolar células do sistema imunológico funcional do coração fornece uma alternativa aos métodos convencionais de digestão da colagenase, que causa a ativação de células imunes indesejadas, resultando em uma capacidade de resposta diminuiu dessas células. Nosso método de isolamento de rendimentos funcional cardíaca células do sistema imunológico, evitando os problemas associados com a digestão enzimática.
Abstract
Cardíacas células do sistema imunológico estão ganhando interesse para os papéis que desempenham no remodelamento patológico em muitas doenças cardíacas 05/01 Estas células do sistema imunológico, que incluem os mastócitos, células T e macrófagos;. Armazenar e liberar uma variedade de mediadores biologicamente ativos, incluindo citocinas e proteases, como triptase. 6-8 Esses mediadores têm se mostrado os jogadores-chave no metabolismo da matriz extracelular pela ativação de metaloproteinases de matriz ou causando acúmulo de colágeno por função modular os fibroblastos cardíacos. 9-11 No entanto, as técnicas disponíveis para isolar células do sistema imunológico têm cardíaca sido problemática, porque eles usam a colagenase bacteriana para digerir o tecido do miocárdio. Esta técnica faz com que a ativação das células imunes e, portanto, uma perda de função. Por exemplo, cardíaco mastócitos tornam-se significativamente menos sensíveis aos compostos que causam degranulação. 12 Por isso, desenvolvemos uma técnica que permite a tele isolamento de células do sistema imunológico funcional cardíaca que levaria a uma melhor compreensão do papel destas células na doença cardíaca. 13, 14
Este método requer uma familiaridade com a localização anatômica do rato processo xifóide axila, e ligamento falciforme, e pericárdio do coração. Estes marcos são importantes para aumentar o sucesso do procedimento e garantir uma maior produção de células do sistema imunológico cardíaca. Estes isolados cardíaca células do sistema imunológico podem então ser utilizados para a caracterização do fenótipo, funcionalidade, maturidade e co-cultura experiências com outras células cardíacas para obter uma melhor compreensão de suas interações.
Protocol
Discussion
Este método de isolamento de células do sistema imunológico cardíaca permite a análise de sua função, o fenótipo, e maturidade, sem a ativação indesejados que normalmente ocorre durante a técnica de isolamento enzimático de digestão tradicional. O número médio total de células obtidas com esta técnica é de cerca de 400.000 por coração de rato, e coloração diferencial e análise de citometria de fluxo destas células indica população mista de linfócitos T (~ 70%), macrófagos (~ 12%) e mastócito…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado por um UNCF-Merck de Pós-Graduação Pesquisa em Ciências Dissertation Fellowship (JLM), National Heart, Lung, and Blood Institute concede RO1-HL-62228 (JSJ) e RO1-HL-073990 (JSJ).
Materials
| Name of Reagent and Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
| Hanks’ Balanced Salt | Sigma | H4891 | One bottle makes 1 L of Hanks’ Balance Salt Solution. Reconstitute Hanks’ Balance Salt Solution as a part of the procedure. |
| Antibiotic- Antimyotic | Gibco | 15240-062 | |
| HEPES | Sigma | H3784 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma | A3912 | |
| 250 mL Nalogene Filter Bottle | Thermoscientific | 157-0020 | |
| 12 N HCL | Fisher Scientific | CAS 7647-01-0 | For 6 N, add equal volumes of HCL to deionized water. |
| 10 N NaOH | Fisher Scientific | SC267 | For 5 N, add equal volumes of NaOH to deionized water. |
| Double Distilled Water |
Table of Specific Equipment:
| Name of Reagent and Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
| 3-O Suture Silk Braided | Ethicon Products | SA64H | |
| Small Animal Ventilator | CWE Incorporated | SAR-830 | Set breathing rate to 40.5 breaths per min. |
| Bevel 18 gauge needle | BD Biosciences | 305199 | Trim needle by 1/2 to 3/4 of its original length for use as a tracheal tube. |
| Teflon Tip (with needle removed) of 24-gauge Baxter quick-cath catheter | Baxter | 2N111 | Reduce the Teflon Tip length by 1/2 to 3/4. |
| 10 cc syringe | Fisher Scientific | 14-823-16B | |
| 15 mL Falcon Tubes | BD Biosciences | 352097 | |
| Sorvall RT6000B Refrigerated Centrifuge | Fisher Scientific | 75-004-377 | Remember to pre-cool and keep at 4°C. |
| Hyclone | Thermoscientific | S300030.02 | |
| Hemocytometer | Hausser Scientific | HS-LB-1483 |
Riferimenti
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