脳浸潤白血球の分離

我々は、マウスからの脳浸潤白血球（BILs）を調製するための方法を説明します。我々はどのように脳全体から浸潤細胞の白血球に富む集団を精製するために迅速な頭蓋内注入法とを経由してタイラーのマウス脳脊髄炎ウイルス（TMEV）をマウスに感染させる方法を示します。簡単に言えば、マウスは、密閉チャンバーのイソフルランで麻酔し、前頭皮質にハミルトンシリンジで注入フリーハンドです。マウスはその後Tenbroeck組織グラインダーを含むRPMIで抽出し、均質化されイソフルラン過剰摂取と全脳による感染後の様々な時点で殺されている。脳ホモジネートを、ミエリン及び他の細胞破片を除去するために、連続30％Percoll勾配を通じて遠心分離されています。細胞懸濁液を、40μmの時に緊張洗浄し、白血球を選択し、精製する不連続をFicoll – Paqueプラス勾配で遠心分離される。白血球を洗浄し、フローサイトメトリーで免疫表現するための適切な緩衝液に再懸濁する。フローサイトメトリーはC57BL / 6マウスにおける感染の初期段階での自然免疫細胞の集団を明らかにする。 24時間後に感染症で、免疫細胞の複数のサブセットにはGR1 ^{+、CD11b +}とF4/80 ⁺細胞の濃縮の人口で、BILsに存在しています。したがって、この方法は、脳内の急性感染症に対する免疫応答を特徴づけるのに便利です。