开发自定义的中国仓鼠卵巢宿主细胞蛋白检测使用声膜微粒子技术

1。微粒的制备标签抗体，用生物素NHS的化学的生物素化程度的测定与生物素抗体的共轭链霉亲和素珠 1-2分钟涡旋重悬在原瓶珠离心管分装成所需的珠子数量洗磁珠3次，用PBST： 放置2分钟，其中包含磁铁珠管吸磁铁管取出上清液。要小心，不要破坏珠取出磁铁管，并加入1 mL PBST 20秒的旋涡悬浮珠离心5秒，删除第珠重复2.3.1-2.3.5两倍多后的第三洗放在磁铁管，吸PBST 添加生物素抗体的珠子和重悬如果必要的话，带来的生物素抗体量高达300μL用PBS。如果抗体量已大于300μL，不添加任何PBS 30分钟，在室温下孵育旋涡振动筛或管肩珠/抗体悬挂用PBST洗3次，在第3步。 与生物素标记的牛血清白蛋白座珠第三洗净后增加10微克/毫克生物素标记的牛血清白蛋白，调节音量至300μL，用PBS如有必要，搅拌孵育30分钟用PBST洗3次，在第3步在100μLPBS/0.05％BSA重悬珠。长期贮存，可加入叠氮化钠使用标准的NHS的荧光协议，fluoresceinate探测器抗体确定的Fluorescination程度 2。 HCP – 发展准备工作的解决方案： 荧光标记抗体（FL – AB）：大多数CHO HCP的检测使用FL -抗体的终浓度为400纳克/毫升。 FL – Ab是添加作为最终的检测量的四分之一，因此工作溶液的浓度为1.6微克/毫升。准备BioScale珠/松弛稀释剂稀释松弛股票这个解决方案。 珠：大多数CHO HCP的检测，使用珠在2X10 5珠/ ml的终浓度。珠试剂构成最终的检测量的四分之一，因此工作溶液的浓度为 8×10的5珠/毫升。准备BioScale珠/松弛稀释剂稀释珠股票这个解决方案。涡珠的股票，以确保所有的珠子悬浮之前卸下等分。 运行缓冲液：运行缓冲液的组成可能要用于开发检测的抗体进行了优化，然而几个CHO HCP的检测已开发利用10 mM的HEPES缓冲液，1％吐温，pH值7.5。 BioScale已研制出一种添加剂为运行缓冲液（与开发套件提供），这是加入浓度为1％，在使用前的缓冲区。 BioScale样品稀释液稀释的标准品和样品。 3。的ViBE系统设置打开盛传工作站连接系统的供应和废物总理系统插入的ViBE盒管道路由准备通过填写标有“示例设置”表检测模板。 BioScale提供的能力有一个检测模板为每个的ViBE工作站检测。这允许用户编辑和保存模板不同的分析，保持一个完整的实验记录表的“注释”中的具体说明。 初始检测模板设置：首先填写表（左上角）的浓度范围在“示例设置”表的检测标准。 下一步，输入表中的其他信息标准的权利（简单列读取设置，一个试剂添加，两种试剂的添加设置）指示多久样品需要孵化盛传工作站，试剂量是多少转移，样本的积累，需要多久，是否是必要的传感器信号调理和净化探头和碳粉盒等填写板布局。 装入样品/试剂板。盛传将提供所需的试剂板卷。样品量可以有所不同，但在一个120μL的总检测量的一半，是一个很好的起点。 应用板覆盖。加载到工作站甲板板。 运行检测启动向导，通过向导，并开始实验。 4。代表性的成果 图1：AMMP三明治免疫测定法 </p> 一个的ViBE工作站上，AMMP检测措施抗原浓度。信号测量珠抗原半抗原抗体结合时，传感器通过半抗原/抗半抗原的相互作用。再生带来的传感器回到开始的状态，消除免疫复合物。 图2：CHO – HCP AMMP含量的校正曲线 上面的图2是一个CHO HCP AMMP检测校准曲线的一个例子。可以分析样品中，来自全国各地的净化流，包括反应器，精度高，重复性。 图3：蛋白A AMMP含量的校正曲线 图3是一个补遗蛋白A AMMP与VIBE剩余蛋白A检测试剂盒进行检测，校准曲线。在相同的套件可以被用来为一1 30分钟的孵育期更快的检测，或者更敏感的结果，并与1，不丧失精度或准确度较长的孵化期，这两者是通常优于相当于ELISA法在用户的更宽的动态范围“手 图4：产品滴度AMMP含量 盛传工作站也可用于一个产品滴度检测，结果如图4所示。不同的表现比其他AMMP实验，这个实验并不需要样品处理较简单的稀释，或珠，并已在“旋转”包含广泛的存活率超过10万个单元格的样品定量验证。 图5：AMMP含量GST – Gadd34生物标志物检测的标准曲线在图5所示的是一种信号盛传生物分析仪（A组）或使用重组GST – Gadd34的AlphaScreen技术获得的标准曲线。盛传平台上的结果约日志使用相同的抗体更敏感。 AMMP利用测量较大的颗粒较少，尚未从溶液相捕获和检测复合物的形成仍好处。 图6：AMMP含量为GST – Gadd34在肿瘤样本的标准曲线在图6中，CWR22异种移植诱导Gadd34从测试盛传生物分析仪（A组）或的AlphaScreen（B组）分析了硼蛋白酶抑制剂的存在或缺乏。盛传平台能够生产的AlphaScreen信号，而体内的肿瘤异种移植的淬火，增加微克蛋白质，灵敏度高，重复性的结果。 这个例子显示了在高度复杂的样品AMMP技术的力量。由于敏感的检测芯片和磁铁靠近芯片的高效率，低磁性微粒可以有效地再现清除之中裂解细胞（包括裂解试剂）和血液碎片的复杂性，低丰度的目标。