Dissection של גוף האדם אלמנטים הזגוגיות לניתוח proteomic

1. מגזר Anterior Dissection. הקרנית היא להסיר תחילה ביצוע חתך בבית לימבוס לתא הקדמי באמצעות להב 15 ° (איור 1). ואז אחד הלהב של הקרנית-scleral מספריים מעוקל מוכנס לתוך החדר הקדמי. חתכים היקפיים מתקבלות הקרנית, הקדמי רק גובלת. 0.12 קוליברי מלקחיים ומספריים ווסטקוט משמשים לחתוך את איריס הקדמי circumferentially לגוף ריסי. גרעין העדשה מוסר עם מלקחיים קוליברי 0.12 או 15 ° להב (supersharp) לבין קליפת המוח ואת הקפסולה עם מלקחיים. 2. Core הזגוגיות שאיפה. מחט מד 23 על מזרק 5 סמ"ק מוכנס לתוך אמצע זגוגי (איור 1). כ 1 מ"ל או יותר של הליבה הזגוגית היא aspirated בעדינות. מדגם ממוקם אז צינור microfuge ולאחר מכן לתוך חנקן נוזלי. 3. Dissection Anterior Hyaloid. Hyaloid הקדמי נחשב טבעת שקופה למחצה על ידי התאמת האור מן האירוע אור צוואר אווז מיקרוסקופ. השאיפה הקודם של הליבה זגוגי המפריד בין hyaloid הקדמי של מבנים אחרים לצורך זיהוי קל. גיליון של רקמה אלסטית הוא שלף בזהירות מהגוף ריסי עם קוליברי או מלקחיים ההלבשה לגזור במספריים Vannas. תמרון זה חוזר על עצמו. מדגם ממוקם אז צינור microfuge ולאחר מכן לתוך חנקן נוזלי. 4. מאגר הזגוגיות Dissection. בעזרת מלקחיים 0.12 לייצב את כוס העין, מספריים ווסטקוט משמשים "פרח" את העין על ידי ובסך הכל ארבעה ברווחים שווים מתח להקלה על קיצוצים מהגוף ריסי לקראת ראש עצב הראייה. Plicata Pars גוף ריסי (איור 2) יוסר כל אחד הרביעים באמצעות מספריים ווסטקוט. הבסיס זגוגי נתפסת אז משני צדי serrata אורה עם מלקחיים על פלאנה Pars לבין הרשתית (איור 2). המתיחה רציף על בסיס זגוגי מוחל עם מלקחיים. חיתוך סדרתית עם ווסטקוט מספריים תמציות רקמה שקופה למחצה עם מראה "מחרוזת פנינים", כפי שהוא נכרת. מדגם ממוקם אז צינור microfuge ולאחר מכן לתוך חנקן נוזלי. 5. Cortex הזגוגיות הסרת. פלאנה Pars הוא נכרת מכל אחד הרביעים במספריים ווסטקוט ידי חיתוך את העלון כ 3 מ"מ אחורית של serrata אורה (איור 2). בין עלונים רקמות, קליפת זגוגי הוא מדמיין כסרט שקוף למחצה. סרט אלסטי נתפסת גם עם 0.12 מלקחיים או המוחזקים על ידי דבקות ספוג Weck-cel כירורגי. קליפת המוח היא זגוגי אז התרחקה מן הרשתית נכרת עם ווסטקוט מספריים (איור 1). מדגם ממוקם צינור microfuge ולאחר מכן לתוך חנקן נוזלי. כל הדגימות נשמרות ב -80 ° C עד מנוצלים לניסויים. 6. נציג תוצאות דגימות רקמה יכול להיות מעובד על ידי מגוון של שיטות ניסויים ספציפיים. במקרה שלנו, דגימות נשלחו לניתוח חלבונים על ידי SDS-PAGE (איור 3). באיור 1. חתך מבט של העין האנושית המתארות substructures שונים של הגוף הזגוגי. הזגוגית הקדמית ביותר היא שכבה collagenous דק הנקרא hyaloid הקדמי. ליבת זגוגי כוללת את כל האזור המרכזי של הגוף הזגוגי. חלק זה של הזגוגית היא מימית יותר בניגוד לבסיס זגוגי, שהוא צמיג מספיק כדי להיתפס על ידי מלקחיים, והוא מחובר היטב לגוף הרשתית ריסי הבסיס. הקפת הליבה הזגוגית היא מעטפת collagenous דק מאוד הנקרא קליפת זגוגי. איור 2. האנטומיה בסיס הזגוגיות. בסיס מסד הזגוגית היא שקופה למחצה של הגוף הזגוגי ממוקם לאורך serrata אורה (חצים לבנים), המהווה את קו הגבול המפריד בין הגוף לבין הרשתית ריסי. הגבול הקדמי של הבסיס זגוגי משתרע על פני פלאנה Pars (קו לבן) של גוף ריסי. הגבול האחורי של הבסיס זגוגי מרחיב 2-3 מ"מ האחורי של serrata אורה (מקף לבן). כדי לבסס את הבלו זגוגי, מלקחיים המשמשים לתפוס את רקמות למשוך אותו מהגוף הרשתית ריסי הבסיס. מוגבה פעם, מספריים ווסטקוט משמשים לחתוך לאורך בסיס. איור 3. אחת ממדי SDS-PAGE של אלמנטים גוף הזגוגיות. ריכוזי חלבון סך hyaloid הקדמי, בסיס זגוגי, ויטהליבה reous, ואת קליפת זגוגי היו 11.24, 20.1, 16.61, 14.24 מ"ג / מ"ל, בהתאמה. ג'ל אלקטרופורזה בוצע ב kV 200 במשך 45 דקות, מוכתם פלמינגו (Bio-Rad), ו דמיינו באמצעות הדמיה VersaDoc המערכת (Bio-Rad). פרופילים של רקמות שונות להראות כמה להקות דומות, המציין או משומר או לחצות מזהם חלבונים, כמו גם להקות ייחודי (כוכבית), המעיד על חלבונים מקומי דיפרנציאלי.