Expansion ex vivo des cellules tumorales T-réactive par le moyen de 1/Ionomycin Bryostatine et la chaîne gamma commune cytokines Formulation
Summary
Un protocole efficace pour la<em> Ex vivo</em> Extension de cellules T réactives tumeur des ganglions lymphatiques drainant la tumeur ou d'autres tissus lymphoïdes secondaires porteurs de tumeurs hôtes est décrite. Ce protocole étend sélectivement les cellules T spécifiques de la tumeur pour une utilisation en immunothérapie adoptive du cancer du sein.
Abstract
Il a été rapporté que les patients du cancer du sein ont pré-existante des réponses immunitaires contre leurs tumeurs 1,2. Cependant, ces réponses immunitaires ne parviennent pas à fournir une protection complète contre le développement ou la réapparition du cancer du sein. Pour surmonter ce problème en augmentant la fréquence des cellules T réactives tumeurs, immunothérapie adoptive a été employé. Une variété de protocoles ont été utilisés pour l'expansion des cellules T spécifiques de la tumeur. Ces protocoles, cependant, sont limités à l'utilisation d'antigènes tumoraux ex vivo pour l'activation des cellules T spécifiques de l'antigène. Très récemment, la chaîne gamma commune des cytokines comme l'IL-2, IL-7, l'IL-15 et IL-21 ont été utilisés seuls ou en association pour l'amélioration de l'anti-tumorale des réponses immunitaires 3. Toutefois, il n'est pas clair ce que la formulation serait le mieux pour l'expansion des cellules T réactives tumeur. Nous présentons ici un protocole pour l'activation sélective et l'expansion de la tumeur des cellules T réactives à partir du modèle de souris transgénique FVBN202 de carcinome mammaire HER-2/neu positifs pour une utilisation en thérapie cellulaire adoptive T du cancer du sein. Le protocole inclut l'activation des cellules T avec bryostatin-1/ionomycin (B / I) et l'IL-2 en l'absence d'antigènes tumoraux pour les 16 heures. B / Je activation imite signaux intracellulaires qui aboutissent à l'activation des cellules T en augmentant la protéine kinase C et de l'activité intracellulaire de calcium, respectivement 4. Ce protocole active spécifiquement les cellules T spécifiques de la tumeur tout en tuant les cellules T non pertinentes. Les cellules B / I-T activées sont cultivées avec de l'IL-7 et IL-15 pendant 24 heures puis pulsé avec de l'IL-2. Après 24 heures, les cellules T sont lavés, split, et cultivé avec de l'IL-7 + IL-15 pour les 4 jours supplémentaires. L'efficacité de tumeur spécificité et anti-tumorale des cellules T ex vivo élargi est déterminé.
Protocol
Discussion
L'expansion sélective des cellules T tumeur réactive avec effecteur la fonction anti-tumorale peut être réalisé en utilisant le protocole proposé B / I d'activation et l'expansion ex vivo avec des cytokines chaîne gamma IL-2, IL-7 et IL-15. Alors que l'IL-2 est un facteur de croissance des cellules T qui peuvent soutenir la différenciation et l'expansion des cellules T spécifiques de l'antigène, l'IL-7 peut inhiber l'apoptose des cellules T et le soutien de leur viabili…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par des subventions du NIH R01 CA104757 (MH Manjili). Nous tenons à souligner l'appui de la VCU Massey Cancer Center et la Fondation du Commonwealth pour la recherche sur le cancer.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bryostatin 1 | Sigma | B7431-10ug | ||
| Ionomycin | Calbiochem | 407950 | ||
| Mouse IL-7 | PeproTech | 217-17 | ||
| Mouse IL-15 | PeproTech | 210-15 | ||
| Human IL-2 | PeproTech | 200-02 | ||
| RPMI1640 | Invitrogen | 11875 | ||
| FBS | Gemini | 100-106 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Cellgro | 30-002-CI | ||
| L- glutamine | Invitrogen | 25030081 | ||
| β- mercaptoethanol | Sigma | M7522 | ||
| anti-CD16/32 antibody | Biolegend | 101302 | ||
| Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit | BD Pharmingen | 556547 | ||
| FITC-CD4 | Biolegend | 100406 | ||
| PE-CD8 | Biolegend | 100708 | ||
| anti-c-Erb2/c–Neu | Calbiochem | OP16 | ||
| PE- anti mouse IgG | Biolegend | 405307 | ||
| formaldehyde | Polysciences | 04018 | ||
| Hemocytometer | Hycor | 87144 | ||
| Light microscope | VWR | V200073 | ||
| Mouse IFN-γ ELISA set | BD Pharmingen | 555138 | ||
| Cell culture flasks | Greiner | 658175 |
Riferimenti
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