In vivo de imagens e tratamentos terapêuticos em um modelo de camundongo ortotópico de câncer de ovário
Summary
Modelos animais ortotópico de câncer de ovário replicar melhor as doenças humanas e, portanto, melhorar nosso entendimento sobre a progressão do câncer e da resposta do tumor à terapia. Um modelo de camundongo recebe uma injeção de intrabursal luciferase células que expressam tumor de ovário. O tratamento é administrado através de gavagem oral. O crescimento do tumor é monitorado por<em> In vivo</em> Imagem do sistema.
Abstract
Câncer humano e resposta ao tratamento é melhor representados em modelos animais ortotópico. Este artigo descreve o desenvolvimento de um modelo de camundongo ortotópico de câncer de ovário, o tratamento de câncer através da entrega de medicamentos orais e monitoramento do comportamento de células tumorais em resposta ao tratamento medicamentoso em tempo real usando in vivo do sistema de imagem. Neste modelo ortotópico, células de ovário tumor expressar luciferase são aplicados topicamente, injetando-los diretamente na bursa mouse onde cada ovário é fechado. Após a injeção de D-luciferina, um substrato de firefly luciferase, luciferase células que expressam gerar sinais de bioluminescência. Este sinal é detectado pelo sistema de imagens in vivo e permite um meio não invasivo de monitorar o crescimento do tumor, distribuição e regressão em animais individuais. Administração de medicamentos via oral por gavagem permite um volume de dosagem máxima de 10 mL / kg de peso corporal a ser entregue diretamente ao estômago e se assemelha a entrega de drogas em tratamentos clínicos. Portanto, as técnicas descritas aqui, o desenvolvimento de um modelo de camundongo ortotópico de câncer de ovário, entrega oral da droga, e in vivo de imagens, são úteis para uma melhor compreensão humana de câncer de ovário e tratamento e vai melhorar o direcionamento desta doença.
Protocol
Discussion
O câncer de ovário é a principal causa de morte entre todas as neoplasias malignas ginecológicas 1. A alta taxa de mortalidade desta doença é em grande parte devido ao seu diagnóstico tardio e à falta de métodos diagnósticos confiáveis 2. Além disso, a quimioterapia convencional, muitas vezes encontra quimiorresistência e recidiva de câncer 3. Portanto, o romance de terapêutica é necessária para efetivamente alvo desta doença. No desenvolvimento de novas terapias alvo o câncer de ovário humano, é fundamental para desenvolver um modelo animal representativo.
Um modelo animal ortotópico tem vantagens em relação aos modelos convencionais xenoenxerto (por exemplo, subcutânea ou intraperitoneal injeções de células tumorais), em que 1) ele reproduz o principal local de formação de tumores, 2) que representa local comum de metástases, e 3) que proporciona células tumorais para interagir com microambiente apropriado 4, 5, 6, 7, 8. Os roedores possuem uma membrana única bursal que circunda o ovário e é contínua com o oviduto. Esta anatomia única de roedores permite a injeção de células tumorais de ovário ortotopicamente. Células tumorais injetadas Intrabursally ovário se comportam semelhante à doença humana, assim, crescendo dentro da membrana intrabursal e espalhando na cavidade peritoneal como progride tumor. Injeção de células luciferases estável expressando proteínas fluorescentes ou também permite que o comportamento de rastreamento de células tumorais em tempo real. Bioluminescentes e / ou tecnologia de imagens fluorescentes torna possível para as células repetidamente imagem tumor durante um longo período de tempo e estudo do crescimento do tumor, distribuição e regressão não-invasivo maneira 9, 10, 11.
Ao estabelecer o modelo ortotópico, é fundamental para remover rapidamente a agulha da bursa após a injecção. Remoção abrupta dos selos agulha do local da punção e impede o vazamento de células injetadas. No entanto, ao mesmo tempo, o movimento deve ser suave para não rasgar o bursa. Se ocorrer uma fuga durante a injeção, pode levar as células a semente no abdômen e potencialmente confundir o estudo, ou seja, prematura se espalhando para fora do ovário. Neste caso, o animal específicas deve ser registrada e seguiu para o desenvolvimento de sites múltiplos tumor no peritônio antes do tratamento ou, alternativamente, eliminados das análises subseqüentes. Antes de realizar gavagem oral, é fundamental para verificar o comprimento do tubo de sonda através da medição da ponta da cabeça do animal para a última costela. É útil para marcar o tubo no nariz do animal e não passar o tubo passado esta marca. Inserção do tubo de passado esta marca pode resultar em uma perfuração no estômago. Determinação do comprimento do tubo é especialmente importante com os animais mais jovens ou animais com peso inferior a 20 g. Após a inserção da agulha sonda para o esôfago, deve haver nenhuma resistência ou luta do animal. É importante não para administrar a solução ou suspensão demasiado rápido, pois isso pode levar ao refluxo e, posteriormente, entregar o volume da dose imprecisos, bem como a adição de estresse para o animal. Para resultados de imagem comparável ao longo do tempo, é desejável para manter o tempo consistente entre a injeção de substrato luciferase e de imagem. O lapso de tempo pode ser determinada tomando série de imagens após a injeção de substrato e observar a cinética de sinais. Desenvolvimento de um modelo de camundongo ortotópico de câncer de ovário, entrega oral da droga, e in vivo de imagens são técnicas necessárias para uma melhor compreensão do desenvolvimento e propagação do câncer de ovário e avaliar novos esquemas terapêuticos que pode vir a melhorar o resultado do paciente com esta doença mortal.
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Ketamine Hydrochloride | Vedco, Inc. | Not Available | ||
| Xylazine Hydrochloride | Lloyd, Inc. | Not Available | ||
| Acepromazine | Vedco, Inc. | Not Available | ||
| D-Luciferin Potassium Salt | Caliper Life Sciences | 122796 |
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