Birincil Mammosferlerin Üretimi: Hücre Gücünü Belirleme Tekniği
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Lombardo vd. al., İnsan Meme Kanseri Dokularından ve Hücre Hatlarından Mammosphere Formasyonu Tahlil. J. Vis. Exp. (2015).
Bu videoda meme kanseri hücre çizgilerinden kanser kök hücrelerinin izole edilmesi anlatılıyor. Bu kanser kök hücrelerini, farklı tohumlama yoğunluklarında karşılaştırmaya izin vererek, kendini yenilemeyi değerlendirmek ve küre oluşturan verimliliği hesaplamak için birincil mammosferler üretmek için kültürlüyoruz.
Protocol
1. İnsan Meme Kanseri Hücre Hatlarından Birincil Mammosfer Üretimi NOT: Steril bir kültür başlığı altında aşağıdaki adımları gerçekleştirin. 2 mM L-glutamin, 100 U/ml penisilin, 100 U/ml streptomisidin ile desteklenmiş DMEM/F12 içeren Mammosphere Media hazırlayın. 20 ng/ml rekombinant insan epidermal büyüme faktörü (EGF; Sigma), 10 ng/ml rekombinant insan temel fibroblast büyüme faktörü (bFGF; Ar-Ge Sistemleri) ve 1x B27 takviyesi. …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 | Lonza | CC-3151 | |
| 2 mM L-glutamine | Sigma Aldrich | G8540 | |
| 100 U/ml Penicillin & Streptomycin | Sigma Aldrich | P4083 | |
| 20 ng/ml Recombinant human epidermal growth factor (EGF) | Sigma Aldrich | E9644 | |
| 20 ng/ml Recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF) | R&D systems | 233-FB-025 | |
| 1x B27 supplement | Invitrogen | 17504-044 | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Thermo Scientific | 12399902 | |
| 0.5% trypsin/0.2% EDTA | Sigma Aldrich | 59418C | |
| Fetal calf serum | First Link UK | 02-00-850 | |
| Trypan blue | Sigma Aldrich | 93595 | |
| Low attachment 6-well plates | Corning | CLS3814 |
Citazione di questo articolo
Generation of Primary Mammospheres: A Technique to Determine Cell Potency. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20211, doi: (2023).