1차 맘모스피어 생성: 세포 효능을 결정하는 기술
Published: April 30, 2023
Abstract
출처: 롬바르도 외. 알., 인간 유방암 조직 및 세포주에서 맘모피어 형성 분석. J. Vis. Exp. (2015).
이 비디오는 유방암 세포주에서 암 줄기 세포를 고립시키는 것을 설명합니다. 우리는 이러한 암 줄기 세포를 배양하여 자가 재생을 평가하고 구체 형성 효율을 계산하기 위한 1 차적인 맘모스피어를 생성하여 다른 종자 밀도에 걸쳐 비교를 허용합니다.
Protocol
1. 인간 유방암 세포 선에서 1 차 유방 스피어의 생성 참고: 멸균 배양 후드 아래에서 다음 단계를 수행합니다. 2mM L-글루타민, 100 U/ml 페니실린, 100 U/ml 연쇄상 구균제로 보충 DMEM/F12를 포함하는 맘모스피어 미디어를 준비하십시오. 20 ng/ml 재조합 인간 표피 성장 인자 (EGF) 추가 하 여 사용 직전에 완전 한 미디어를 준비; 시그마), 10 ng/ml 재조합 인간 기본 섬유?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 | Lonza | CC-3151 | |
| 2 mM L-glutamine | Sigma Aldrich | G8540 | |
| 100 U/ml Penicillin & Streptomycin | Sigma Aldrich | P4083 | |
| 20 ng/ml Recombinant human epidermal growth factor (EGF) | Sigma Aldrich | E9644 | |
| 20 ng/ml Recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF) | R&D systems | 233-FB-025 | |
| 1x B27 supplement | Invitrogen | 17504-044 | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Thermo Scientific | 12399902 | |
| 0.5% trypsin/0.2% EDTA | Sigma Aldrich | 59418C | |
| Fetal calf serum | First Link UK | 02-00-850 | |
| Trypan blue | Sigma Aldrich | 93595 | |
| Low attachment 6-well plates | Corning | CLS3814 |
Citazione di questo articolo
Generation of Primary Mammospheres: A Technique to Determine Cell Potency. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20211, doi: (2023).