한 단계 Metabolomics : 탄수화물, 단일 절차 계량 유기 및 아미노산

소변 샘플 처리 절차 37 ° C의 물을 욕조에 소변 샘플을 해동. 원본이 손상 됐다면 새 용기에 가만히 따르다. 샘플 13 ML 최대 나누어지는를 타고 표시 원뿔 원심 분리기 튜브에서 -20 ° C에서 그것을 저장합니다. 측정 및 굴절계의 소변 방울의 커플을 배치하여 시료의 광학 밀도를 기록합니다. 0.2 음 필터를 통해 샘플을 필터링합니다. 광학 밀도에 따라 아래의 샘플의 볼륨을 측정 1.000-1.009 1.00 ML 1.010-1.019 0.50 ML 1.020-1.050 0.25 ML + 0.25 ML H 2 O ; 10 nmoles D 3 Methylmalonic 산성, 100 nmoles 다음 13 C 3 락트 산의 각 13 C 3 pyruvate, 13 C 2 15 500 nanomoles (nmoles) 3 크레아틴 : 지정된 볼륨이 다음 내부 표준을 포함하는 Reactivial로 전송됩니다 N 글리신, 세린 D 3, D 5 페닐알라닌, D 11 hexanoylglycine, 15 N 2 orotate, D 4 sebacic 산성, 13 C 6 포도당, D 6 이노시톨 및 D 5 트립토판. 7.5 단위 / urease의 μl 솔루션 (Calzyme 연구소 카탈로그 안돼. 116A0100) 20 microliters는 (μl) 다음 플러시 및 불활성 심장을 통해 CO 2에 따라 봉인있는 예제에 추가됩니다. 더 많은 이산화탄소 가스를 30 분 압력을 유지 15 분 간격으로 추가 ° C가 샘플은 37에서 열립니다. urease 솔루션 20 μl 이상은 유리병이 이산화탄소로 플러시이며, 추가 및 예제는 또 다른 15 분 동안 37 ° C에서 관리하고 있습니다. 30:70 아세톤 500 μl : 메탄올이, 추가 고무 심장이 테플론 코팅 심장으로 대체되며, 샘플은 15 분 -20 ° C에서 차게됩니다. 고체는 다음 깨끗한 2.0 CC Reactivial (Supelco / 시그마)에 decanted 1500 RPM X 10 분 원심 분리에 의해 제거됩니다 다음과 같이 triethylammonium의 trifluoroacetate (차 / TFA) (시그마)를 추가합니다 1.00 ML 시료 20 μl 0.5 ML, 이하, 시료 40 μl 70 질소 기류 하에서 acetonitrile과 장소에서 최고 ° C 일정한 볼륨이 달성 때까지 (차 / TFA가 유지됩니다) (~ 15 분). 침전 양식 (~ 10 분마다)까지, 4까지 시간을 단계 13를 반복합니다. 약 2 분 동안 식지. (~ 4:00 분) 이상의 종기에주의하고, 건조되고, 메틸렌 클로라이드로 내려 톱. 15 단계를 반복합니다. 다음과 같은 속도로 MSTFA (N – 메틸 – N – trimethylsilyltrifluoroacetamide) (과학 열)를 추가합니다 1.00 ML 시료 150 μl 0.50 ML, 이하, 시료 200 μl 70 질소 분위기와 부화 이하 총액 ° 1 시간 C. 가스 크로마토 그래프 / 질량 분석계에 대한 분석, 질소 분위기에서 microvials로 전송합니다. 애질런트 5975 GC / MS에 의해 자동 분사에 대한 플레이스 microvials : 악기 온도는 다음과 같습니다 주입기 200 ° C, 인터페이스 250 ° C, 오븐 80 ° 1 분 C, 4 램프 ° C / 분 80-130 ° C, 램프에 6 ° C / 분 130-200 ° C, 12 ° C 램프 / 분 200-285 ° C, 10 분 만요. 칼럼 : 25m, 320 마이크론 ID, 0.5 미크론 필름 두께 DB – 5. 질량 분석기 : 소스 230 ° C, 쿼드 150 ° C, 2.46 스캔 / 초에서 스캔 50-650 AMU. 솔벤트 지연 3.5 분. 대표 결과 주시기 바랍니다 여기를 클릭 대표 결과를 볼 수 있습니다.