Drosophila Quantifizierung der neuromuskulären Junction (NMJ): Eine Methode zur Bewertung der synaptischen Morphologie und Funktion
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: Castells-Nobau, A., et al. Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology. J. Vis. (2017).
Die Neuromuskuläre Schnittstelle Drosophila (NMJ) wird als Modell verwendet, um die Morphologie und Funktion von Synapsen zu studieren. Dieses Video beschreibt wichtige Funktionen, die Forscher quantifizieren, um das NMJ zu charakterisieren. Das Beispielprotokoll zeigt eine Software, die in der Lage ist, die Quantifizierung automatisch durchzuführen.
Protocol
Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Castells-Nobau et al.,Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology, J. Vis. Exp. (2017). 1. Anforderungen vor der Bildverarbeitung Führen Sie Drosophila offene Buchvorbereitungen der dritten instar wandernden Larven (L3), wie zuvor beschrieben. Co-Immunolabel Drosophila NMJ Terminals mit einer Kombination von zwei Marke…
Representative Results
Abbildung 1: Beispiele für unangemessene Makrosegmentierungsergebnisse. Ergebnisbilder nach dem Ausführen von “Drosophila NMJ Morphometrics” oder “Drosophila NMJ Bouton Morphometrics”. Teile der synaptischen Klemme sind nicht in der gelben Umrisslinie enthalten (A). Teile des Hintergrunds sind in der synaptischen Klemme durch die gelbe Umrisslinie enthalten (B). Blaue …
Materials
| Immunostaining | Dilution | ||
| Mouse anti-discs large 1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | AFFN-DLG1-4D6 | 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Rabbit anti-horseradish peroxidase | Jackson IR | 323-005-021 | 1/500 |
| Rabbit anti-Synaptotagmin | Gift from Hugo Bellen | Jan-00 | |
| Mouse anti-Cysteine string protein | Developmental Studies Hybridoma Bank | DCSP-1(ab49) | 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Mouse anti-Bruchpilot | Developmental Studies Hybridoma Bank | nc82 | Jan-50 |
| Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 | Life technologies | A11029 | 1/200 |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 | Life technologies | A11011 | 1/500 |
| Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit | ThermoFisher | Z25006 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant | ThermoFisher | P36930 | |
| Equipment | |||
| Confocal microscope or fluorescence microscope | Leica SP5 | ||
| Zeiss Axio imager | |||
| Computer | Mac or Pc | ||
| Software | |||
| FIJI |
Citazione di questo articolo
Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Quantification: A Method to Assess Synaptic Morphology and Function. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20107, doi: (2023).