Overview
I denne artikkelen diskuterer vi hvordan du etablerer en brystkreftmodell hos kvinnelige mus ved å injisere brystkreftceller i brystfettputen. Eksempelprotokollen demonstrerer den ortotopiske injeksjonen.
Protocol
Dyreforsøk ble utført i samsvar med bestemmelsen og den generelle anbefalingen av kinesisk eksperimentell dyreforvaltningslovgivning og ble godkjent av Institution of Animal Care and Use Committee of Capital Medical University (refnr. AEEI-2014-052). Kvinnelige Balb/c mus i alderen 6 til 8 uker ble brukt.
1. Forberedelse av celler og dyr
- En dag før operasjonen barberer du håret rundt de fjerde brystvortene for å eksponere operasjonsområdet.
- Bruk den ene hånden til å holde musen tett på baksiden for å sikre at musen ikke beveger seg fritt, skru opp musen for å eksponere magen for operatøren, og bruk deretter en annen hånd til å barbere pelsen rundt de fjerde brystvortene med en elektronisk barbermaskin.
- Legg et tynt lag med hårfjerningskrem rundt brystvorten i 30 - 60 s, rengjør kremet med destillert vann, og tørk deretter musen med mykt papir.
- På operasjonsdagen samler du murin brystkreftceller (4T1-luc2), teller cellenummeret og justerer celletettheten til 2 x 105 celler / ml i fosfatbufret saltvann (PBS) i sterile mikrocentrifugerør og holder dem på is. For hver mus fremstilles 1 x 104 celler / 50 μL i en 1 ml sprøyte.
2. Ortotopisk injeksjon
-
Anestesi av mus
- Induser anestesi. Sett musene i en lukket gjennomsiktig beholder og slå på 2% isoflurangass for å bedøve musene i ca 5 min, til de alle legger seg ned og sovner.
- Oppretthold anestesi. Overfør musene fra beholderen til individuelle anestesimasker, legg litt veterinærsalve på øynene for å unngå tørrhet, hold musene supinely med brystvorten utsatt for operatøren, og la dem fortsette å inhalere isoflurangass i noen minutter til injeksjonen er utført.
- Bekreft suksessen til anestesi ved mangel på tå klype abstinensrefleks.
- Påfør oftalmisk salve på musenes øyne for å forhindre tørrhet i øynene.
MERKNAD I henhold til beholderstørrelsen og antall individuelle anestesimasker tilgjengelig, kan en gruppe mus bedøves sammen og injiseres en etter en under individuell anestesi.
-
Injeksjonens ytelse
- Bruk den ene hånden til å telte opp huden rundt den fjerde brystvorten med pinsett, for å sette opp en oppløftet "tunnel" som sprøyten skal følge. Bruk den andre hånden til å holde sprøyten med nålen vendt oppover for å komme inn i huden subkutant ved 5 - 10 mm fra brystvorten; Følg deretter "tunnelen" til nålespissen kommer nær brystvorten, flytt nålespissen forsiktig opp i mammaryfettputen til nåleøyet kommer under brystvortespissen, kast pinsettene og injiser cellene sakte.
- Snu nålen litt og trekk sprøyten sakte tilbake; Bruk en bomullspinne til å trykke nålesåret i 10 -20 s for å sikre at det ikke er væskesanse.
- Vær oppmerksom på den fjerde brystvorten for å bekrefte en vellykket injeksjon: en hvit gjennomsiktig flat sfære med brystvorten, da senteret kan observeres (Figur 1).
- Hold musene bedøvet i et minutt for å unngå å la musene komme seg og bevege seg for raskt, noe som vil føre til at injeksjonssåret åpnes og svulstcellene lekker ut.
Figur 1: Bilder før og etter den ortotopiske injeksjonen ved pattedyrfettputen til kvinnelige Balb/c-mus. Operasjonen ble utført, og bildene ble tatt mens musene var under isofluranbedøvelse. A, før injeksjon, B, etter injeksjon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
1 mL syringe | Becton, Dickinson and Company | A257 | cell injection |
hair removal cream | Veet | - | hair removal cream |
Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | - | ophthalmic ointment |