Фокусное церебральный Модель ишемии по эндоваскулярной окклюзии шов средней мозговой артерии в Крыса

MCAO Крыса Модель Подготовка предоперационного Асептическая техника должна использоваться для всех выживания хирургических процедур. Лечить хирургических рабочую поверхность с коммерческими дезинфицирующих и подготовить стерильный хирургический пакеты документов, шторы, марлю, тампоны, швы, и лезвия скальпеля в автоклаве. Хирургическую маску, волосы капота и стерильные перчатки. Germinator сухой шарик стерилизатор также используется для стерилизуйте хирургических инструментов между процедурами, если несколько операций крыса будет сделано в течение одной сессии. Prewarm с водяной рубашкой теплокровных одеяло и место под абсорбирующей прокладки для предотвращения гипотермии у крыс во время операции. Место спонтанно гипертензивных крыс (или другого линия крыс по выбору) в индукции камеры и вызывать анестезию с 5% изофлуран (наркозный аппарат должен быть установлен до 1,0 л / мин O 2 и 1,0 л / мин N 2 O). Нижняя до 1-2% изофлуран для поддержания анестезии. Применение искусственного мазь Слезы на обоих глазах. Бритье горло и оставила область шеи за пределы предполагаемого места разреза использовании ножницы (Остер A5 с лезвием № 10). Применить Бетадин к марлевым тампоном и дезинфицировать кожу, начиная от центра хирургической области, спирали наружу. Промыть стерильной марли площадку, содержащие 70% этанола, двигаясь площадку в аналогичной схеме. Повторите оба шага в общей сложности трех циклов. Inject 0,2 мл 0,5% бупивакаина подкожно вдоль предполагаемого места разреза. Место крысы в ​​стерильных Stockinette или накрыть стерильной хирургической драпировка. Переходные окклюзии СМА Под операционным микроскопом, вентральный вырез средней линии не производится, и поверхностной фасции изрезана. Под поверхностной фасции, есть железистой ткани слева и три мышцы, которые образуют треугольник: грудинно-подъязычный, которая лежит на средней линии трахеи; двубрюшной (легко отождествить с его блестящей белой сухожильной части) и, наконец, грудино-сосцевидный мышцы. Тщательное острые и тупые рассечение производится в рамках треугольника определить сонной артерии (эксклюзивный тупой диссекции может быть предпочтительным, некоторые, чтобы минимизировать случайные повреждения ткани). Внешние, внутренние, так и общей сонной артерии (ЭКА, ICA, CCA) подвергаются. Сонной артерии большого и заметно импульсов. Блуждающего нерва видно бегущую вдоль наружной стороны как общих, так и внутренней сонной артерии и резко расчлененный с общей и внутренней сонной артерии. Два ЭКА ветви затем резко расчлененный, первый филиал заголовком медиально и второй ветки заголовком боков. Обе ветви обезболивающий укол и вырезать, который позволяет для большего удобства в мобилизации крупных судов. ЭКА в настоящее время более расчлененный рострально. Подъязычной кости могут возникнуть, и это будет ограничивать масштабы ростральной рассечение. Наружной сонной артерии связан с дистально, как это возможно, с 6-0 шелковые нити. Другой 6-0 шелковых шва помещается свободно вокруг ЭКА возле бифуркации с МКА. Убедитесь, что не закрывают сосуд, как внутрипросветного шов, который будет использоваться для окклюзии будет идти до конца здесь на более позднем этапе. Микрохирургическая клипы размещаются на общей и внутренней сонной артерии вблизи бифуркации. Начальное парциальное arteriotomy создается между двумя шелковыми шва связи на наружной сонной артерии. Ввести 2,2 -3,0 см длиной 4-0 шва нейлона мононити, с изломом см 2,0 от ее округлые, кремния покрытием наконечника, в ЭКА просвет вниз к ОСО где микрохирургических клип находится. Эти швы являются коммерчески доступными (Doccol Corp, Редлендс, штат Калифорния, США). Разрежьте оставшуюся часть ЕЦА (на месте частичного arteriotomy), чтобы освободить пень и положение пень ниже бифуркации ЭКА и ICA, это будет более легко позволяют внутрипросветного шов скатиться в ICA. Затяните шелка вокруг шва культи ЭКА для обеспечения внутрипросветного шов нейлона и предотвратить кровотечение, а затем удалить микрососудистых клип из МКА. Открытое клипа медленно, прежде чем снимать ее для проверки кровотечение. Продолжите нейлона шва от ЭКА в ICA просвета в средней мозговой артерии (СМА). Эта длина, как правило, 18-20 мм и является причиной для размещения излом шва до установки. После переменной длины из нейлона шов вставляется, сопротивление может ощущаться. Если это произошло с большей частью нейлона шов еще присутствует вне судна, это означает, что шов, скорее всего, ввод крылонебный артерии (см. примечание ниже). Отойдите назад и кривой шов слегка продолжить вдоль ICA, которая будет работать более медиально. Кроме того, рассечение происхождения PPA может быть сделано, чтобы лучше представить себе путьиз внутрипросветный нити. Продолжить, чтобы вставить нейлона шва, пока не почувствуете сопротивление во время и после 2 см изломами позиции. На данный момент, внутрипросветного шов заблокировала начало MCA. MCA окклюзии могут быть подтверждены путем мониторинга уменьшении региональных мозгового кровотока использованием лазерного доплеровского расходомера (см. таблицу материалов для одного оборудования источника). Также отметим, что происхождение крылонебный артерии прочь ICA могут быть непосредственно связаны прочь, если это предпочтительно, для того, чтобы избежать случайного интубации этого судна с внутрипросветный шва. Начало таймер и записывать время начала окклюзии. Удалить из microclip ОСО. Закрыть разрез (дермы, panniculus carnosus, слои подкожной клетчатки) быстро с 3-0 шелковых шва (простой непрерывный узор будет способствовать открытию для реперфузии) и осторожно поместите крысы в ​​клетке восстановления. Проверьте, что клетке пол вокруг носа и рта не содержит существенных постельные принадлежности и контролировать восстановление после наркоза. Восстановление кровотока СМА (реперфузия) Незадолго до окклюзии период должен закончиться, повторно обезболить крысы, продезинфицировать место разреза с Бетадин и 70% этанола (3 циклов, как и раньше) и снова открыть разрез, удалив закрытия швов. Место microclip на ОСО, как и раньше. Вывод частично окклюзии шва от МКА до конца шва виден через ICA. Не в полной мере удаления от шва ICA / ЭКА! Место microclip на ICA выше конца внутрипросветного шва. Полностью удалить окклюзии шва и плотно галстук пень ЕЦА. Запись конце окклюзии (реперфузия начала) время. Удалить microclip от ICA. Удалить из microclip ОСО. Смочите регионе несколько капель стерильного физиологического раствора и закрыть разрез слоя (дермы, panniculus carnosus, подкожной клетчатки) с 3-0 шелковых шва с помощью простой прервал узор. Администрирование 0,05 мг / кг бупренорфин (или другого соответствующего послеоперационного обезболивающего после вашего институциональных принципов) в брюшную пространства. Inject 5cc из нагретого солевой внутрибрюшинно. Это позволит обеспечить гидратацию во время стадии восстановления. Монитор восстановления крыс от наркоза. После крыс восстановилась, тест на поведенческие указанием миокарда, держа крысу за хвост и наблюдая ли крысы может обернуться для обеих сторон. Свернувшись в одну сторону не ожидается. Простые весы скоринг может быть использован для записи начальный период после инфаркта behavorial функционирования (см. Обсуждение). Дополнительное введение бупренорфина (той же дозировке, что и выше) должны быть предоставлены все 6 до 8 часов в течение 24 часов облегчения боли. Расширение обезболивания, если животное демонстрирует признаки дискомфорта. Представитель Результаты Рисунок 1. Окклюзия средней мозговой артерии с помощью эндоваскулярных шва. Упрощенная схема черепно системы кровообращения у крыс показано с кремнием покрытием внутрипросветного шов окклюзии происхождения MCA. О. А. и С. ответвляется левого ЭКА были перевязаны и шовный галстук вокруг ЭКА пень держит внутрипросветного шов на месте. ACA, передней мозговой артерии; Б.А., основной артерии; ОСО, общей сонной артерии; ЭКА, наружной сонной артерии; ICA, внутренней сонной артерии; MCA, средней мозговой артерии; О.А., затылочной артерии; СПС, задней мозговой артерии; PComA, задней соединительной артерии; PPA, крылонебный артерии; ST, улучшенные артерии щитовидной железы. Рис адаптировано из Сасаки и др. 4. И Ли 3. Рисунок 2. Представитель магнитно-резонансной томографии корональных участки мозга крыс через 24 часа после 1 часа переходные MCAO. Отека мозга сопровождающих фокальной ишемии визуализируется в Т2-взвешенной МРТ изображений. Зона инфаркта появляется гиперинтенсивным (яркий) на Т2 изображениях. Аналогичные тенденции инфаркта можно увидеть с более продвинутыми МРТ методы, такие как диффузионно-взвешенных изображений и кажущийся коэффициент диффузии отображение 5. Рисунок 3. Представитель корональных участков мозга крысы окрашивали TTC 24 часов после 1 часа переходные MCAO. TTC окрашивания показывает белый (неокрашенных) инфаркта областей коры головного мозга и полосатого тела в том же крыса, как показано на рисунке 2. Обратите внимание, что общая картина координационного ишемических поражений похож на таковой у МРТ Т2-взвешенных изображениях, хотя последняя область инфаркта определяется гистологически может быть немного меньше, чем T2 поражения.