Выполнение и обработка FNA Передней жировой ткани для амилоида

Введение Системный амилоидоз сильно варьирует заболевание, которое относится к внеклеточным отложением различных белков, которые все вместе называются амилоида. Осаждение этих амилоидные фибриллы с бета плиссированные конфигурация приводит к различным клинические проявления в зависимости от органов, участвующих. Наиболее клинически значимых проявлений системного амилоидоза отмечаются, когда есть участие критических органов, таких как сердце, печень, и / или почек. Исторически эти участвуют органы были бы биопсию, чтобы продемонстрировать наличие амилоида. Эти умеренно инвазивных процедур, проводимых в том числе значительный риск кровотечения. Жир стремление площадку тех пор было показано, чтобы обеспечить надежную и неинвазивный метод для выявления амилоида в системный амилоидоз 1. Эта процедура существенно схожей с липосакцией подкожно-жировой клетчатки в передней брюшной стенке под местной анестезией для получения фиброзно-жировой ткани для оценки скудные депозитов амилоида в малой кровью стенок сосудов 2. Наиболее часто используемые методы идентификации амилоида в ткани остается характерным яблочно-зеленый двулучепреломления картины видно, когда Конго красный окрашенных срезах визуализируются под микроскопом поляризованный свет 3. Когда жир стремление площадку осуществляется, Конго красные пятна может быть сделано либо на прямую смазывают слайдов или клеточных препаратов блок атмосферный жировой ткани. Однако у пациентов на ранних стадиях амилоидоза имеют скудную депозиты амилоида, что значительно снижает чувствительность Конго красный окрашенных ячейки блока разделы 4,5. Ультраструктурные оценка жира аспиратов площадку с помощью электронной микроскопии имеет лучшую воспроизводимость и улучшенной чувствительностью 4. Поэтому, рекомендуется представить весь жир аспиратов площадкой для подготовки ячейки блока и для выполнения электронной микроскопии 2. Жир стремление площадкой является относительно низкая стоимость и неинвазивный метод для получения тканей для диагностики системного амилоидоза. В этой статье описывается процедура жира стремление площадку вместе с подробными сведениями об обработке образцов представить образец для окрашивания Конго красным и ультраструктурные оценки с помощью электронной микроскопии. В этом видео, мы демонстрируем это воспроизводимая и простая процедура для получения оптимального диагностического материала. 1. Выполнение FNA Передней жировой ткани А. обезболивания в данной местности (рис. 1 и 2) Прием алкоголя тампоны или агента очищения кожи предпочитают конкретного учреждения, чистая кожа на нижнем квадранте области живота сбоку от средней линии и ниже пупка (рис. 1). Марк ромбовидной формы площадью около 2 х 2 дюйма, как показано на рисунке 1 с маркером. Аспирируйте примерно 10 мл 1% лидокаина с 18G иглу. Прикрепить 25G 1 ½ дюйма иглы шприца. Удалите пузырьки воздуха, нажав вертикально шприц, одновременно нажимая на поршень пока жидкость не обойтись и без воздушных пузырьков присутствуют. Обезболить вдоль границ ромбовидной области уже отмечены, как показано на рисунке 2. Начните с вставкой 25G иглу под кожу в точке и осторожно толкать иглу подкожно в точке X. Отойдите на поршень шприца, чтобы убедиться, что вы не в сосуде. Затем медленно толкать поршень проникнуть до 2,5 мл лидокаина (около ¼ от лидокаина в 10 мл шприц) при выводе иглу в точку, не давая игла вышла из кожи в точке А (рис. 2a3). С иглой по-прежнему под кожей изменить направление к точке Y (рис. 2A4) и нажмите иглой подкожно точки Y (рис. 2b1). Как и прежде, убедитесь, что игла не находится в сосуде и обойтись примерно в 2,5 мл лидокаина, медленно снять иглу через точку (рис. 2B3 через 2В4). Повторите аналогичные шаги, начиная с точки В и отпуск лидокаина подкожной от точки В к Х и В к Y (рис. 2c1 через 2d4). Предотвращение кровотечения из уколов и B фирмой применения стерильных кусок колеи. Теперь можно проверить, что этот район под наркозом, слегка касаясь кожи в течение анестезии ромбовидной кончиком / углу кусок марли хлопка, по сравнению с соседними ненаркотизированных кожи. Б. Выполнение жира стремление площадки (рис. 3) (Применение местной анестезии до выступления жира стремление площадки могут быть обойдены, в зависимости от региональных и индивидуальных предпочтений. Правильно выполнены FNAB процедуры для передних жира стремление площадки может быть завершена в одном укол. Однако в зависимости от болевого порога индивидуального пациента , маневрирования 18G иглу взад и вперед, чтобы ткань подкожно-жировой клетчатки относительно distresпеть. Обезболивания метод, описанный здесь достигается эффект только в двух уколов иглой с 25G и предотвращает боли с улучшением толерантности к процедуре.) Соберите 18G 1 ½ дюйма иглы на 10 мл шприца. Горы шприц иглой сборки в шприц сцепление ("FNAB сцепление / пистолет") для надлежащего применения и выпуска вакуума. Вставьте кончик иглы в подкожно-жировой клетчатки в очищены и анестезия ромбовидной области (рис. 3а). Полностью отказаться поршень шприца с иглой в подкожную ткань для создания вакуума (рис. 3б). Поддерживать вакуум и маневра иглы вперед и назад в различных направлениях в подкожно-жировой клетчатки (рис. 3в через 3i). Каждый удар должен быть как можно дольше с длиной иглы выбраны не давая игла вышла из кожи. Максимальная частота дискретизации достигается за счет изменения направления с каждым ударом (рис. 3i). Важно сохранить направление иглы касательной к серозной и параллельно поверхности кожи, чтобы избежать проколов брюшной полости. Фиброзно-жировой ткани накапливается в шприц. После достаточно фиброзно-жировой ткани фрагментов (до 1 мл фрагменты богатых кровь, смешанную образца) извлекаются, выпуск вакуумного полностью и удалить иглы (рис. 3 Кб). У пациента или помощник Приложите усилие на площади процедуру с площадки марли, чтобы предотвратить кровоизлияние крови. 2. Обработки образцов Место не менее 5-6 фрагменты фиброзно-жировой ткани в глутаральдегида решение для электронной микроскопии (рис. 4В). В зависимости от институциональных протокол, несколько мазков фрагменты фиброзно-жировой ткани может быть получен за счет распределения их между двумя предметными стеклами (рис. 4А). Оставшийся материал разрешается сгусток в шприц (это может занять 5-7 минут, в зависимости от времени свертывания) (рис. 4С). Аспирируйте 10% формалина в шприце, так что сгустки материала ткани фиброзно-жировой смещается от стены шприц и свободного плавания (рис. 4С2). Удалите поршень из шприца (рис. 4C3) и передачи сгустками ткани в фиброзно-жировой 10% формалина контейнер с открытым концом шприц противоположном конце сопла (рис. 4С4). Этикетка контейнеры надлежащим образом и представить глутаральдегида для электронной микроскопии и формалина для H & E раздел и Конго красное пятно для оценки под поляризационным микроскопом. Если мазки готовы, они могут быть обработаны в соответствии с протоколом отдельные лаборатории. Рисунок 1. Площадь для анестезии для FNAB передней жировой ткани. Рисунок 2. Обезболивания в регионе. Рисунок 3. Выполнение FNAB передней жировой ткани. Рисунок 4. Обработка передней жировой ткани аспирата, которые будут представлены в лабораторию для выявления амилоидных отложений. 3. Представитель Результаты Рисунок 5. Амилоида в стенках мелких кровеносных сосудов фрагменты фиброзно-жировой ткани. Фиброзно-жировой ткани в формалине обработаны, парафин, окрашивали Конго красный, и рассмотрены поляризационные световой микроскопии. Амилоида в стенках мелких кровеносных сосудов показывает, зеленого яблока двулучепреломления (белая стрелка). Рисунок 6. Ткань не хватает амилоидоза. Двулучепреломления зеленого яблока отсутствует в тканях различных пациентов без амилоидоза. Синий двулучепреломления (белая стрелка) коллагеновых волокон, как правило, присутствуют почти во всех образцах. Рисунок 7. Фибриллы в соответствии с амилоида в стенки кровеносного сосуда. Электронная микрофотография прямые, неветвящиеся, случайно рассеянные 8-10 нм в диаметре волокон образована амилоида в стенки кровеносного сосуда.