アミロイドのための前方脂肪パッドのFNAの実行と処理

はじめ全身性アミロイドーシスは、総称してアミロイドと呼ばれる様々なタンパク質の細胞外沈着を参照している非常に可変性疾患です。 βプリーツ構成でこれらのアミロイド線維の沈着が関与する臓器に応じて様々な臨床症状につながる。このような心臓、肝臓、および/または腎臓などの重要臓器の関与がある場合に全身性アミロイドーシスの臨床的に最も関連する症状が記載されています。歴史的に、これらの浸潤臓器は、アミロイドの存在を実証するために生検される。これらの適度侵襲的処置は出血を含む重大なリスクを運んだ。脂肪パッドの吸引は、以来、全身性アミロイドーシス1のアミロイドの検出のための信頼性と非侵襲的方法を提供することが示されている。この手順では、小さな血管の壁2に乏しいアミロイドの沈着を評価するための線維脂肪の組織を取得するために局所麻酔下で前腹壁の皮下脂肪の脂肪吸引に本質的に同等です。 組織におけるアミロイドの同定のための最も頻繁に使用方法は、コンゴレッド染色した切片は、偏光顕微鏡3で視覚化するときに見られる特徴的な青リンゴ色の複屈折パターンのまま。脂肪パッドの吸引が行われるときは、コンゴレッド染色は、直接塗抹スライドまたは吸引脂肪組織の細胞ブロック標本のどちらかで行うことができます。しかし、アミロイドーシスの初期段階で患者が大幅に4,5コンゴ赤染色細胞のブロックのセクションの感度を減少させるわずかなアミロイド沈着を、持っている。電子顕微鏡による脂肪パッドの吸引の超微細構造評価は、より良い再現性と感度の向上4とを有している。したがって、セルブロックの両方を調製するため、電子顕微鏡2を実行するためのすべての脂肪パッドの吸引を提出することをお勧めします。 脂肪パッドの吸引は、比較的低コストおよび全身性アミロイドーシスの診断に組織を得るための非侵襲的方法である。この記事では、電子顕微鏡によるコンゴレッド染色と微細構造評価の両方に検体を提出するサンプルの処理についての詳細と一緒に脂肪パッドの吸引の手順を説明します。このビデオでは、我々は最適な診断材料を取得するために、この再現性と簡単な手順を示しています。 1。前歯部脂肪パッドのFNAの実行ローカルエリアのA.の麻酔（図1＆2） アルコール綿棒または特定の機関によって好ま皮膚洗浄剤を使用して、正中線と臍下（図1）の外側腹部の下腹部の領域で皮膚を洗浄。 としてマーキングペンで図1に示す2 × 2インチ約菱形形状の領域をマークします。 1％の吸引約10 mLを18G針でリドカイン。 25G 1を取り付けます½シリンジにインチ針を。液体を分配しても気泡が存在しないされるまでプランジャーを押しながら直立シリンジをタップして、任意の閉じ込められた空気を削除します。 図2に示すように、既にマーク菱形領域の境界に沿って麻酔する。ちょうどポイントで皮膚の下に25G針を挿入して起動し、慎重にX.を使用すると、容器内にないことを保証するために注射器のプランジャーを後方に引いて指すように、皮下針を押してください。その後徐々に針は、針がポイント（図2A3）で皮膚から出てくるさせることなく参照するように撤退しながらリドカインの2.5mLの（10 mLシリンジのリドカインの¼約）まで潜入するためにプランジャーを押してください。針でも、皮膚の下に点Y（図2A4）に向かって方向を変更するとポイントY（図2B1）に皮下針を押してください。以前と同じようにゆっくりとポイントを介して針を引き出しながら、針が血管内にないことを確認し、リドカインの約2.5 mLを分注する（2B4〜図2B3）。 YにXとB（2D4〜図2C1）に点Bから点Bと調剤リドカイン皮下から始まる同様の手順を繰り返します。呵責からの出血を防ぎ、無菌ゲージピースの会社のアプリケーションによるB。 これで、面積は軽く、隣接する無麻酔皮膚と比較することによって、先端/綿のガーゼ片のコーナーで麻酔菱形の中で皮膚に触れることによって麻酔であることを確認することができます。 B.は、脂肪パッドの吸引（図3）の実行 （前の脂肪パッドの吸引のパフォーマンスへの局所麻酔の適用は、地域や個人の好みに応じて、バイパスされる可能性があります。前方脂肪パッドの吸引のための適切に行わFNABの手順が1つの刺し傷で完了することができます。しかし、個々の患者の痛みのしきい値に応じて、皮下脂肪組織に前後に18G針を操縦するのは比較的distresです歌う。ここで説明する麻酔の方法は、25G針で2つだけの呵責に効果を発揮し、手順に耐性が向上して痛みをaverts。） 10mLのシリンジに18G 1 ½インチの針を組み立てます。適切なアプリケーションと真空のリリースのための注射器のグリップ（"FNABグリップ/銃"）で注射針を装着してください。 クレンジングと麻酔菱形の領域（図3a）内に皮下脂肪に針の先端を挿入します。 完全真空（図3b）を生成するために皮下組織に挿入された針と注射器のプランジャーを引っ込める。 真空を維持し、皮下脂肪（3iの〜図3C）への様々な方向に前後に針を操縦。各ストロークは、針が皮膚から出てくるさせることなく、選択された針の長さをできるだけ長くしてください。最大のサンプリングは、各ストローク方向（図3iを）変えることによって実現される。漿膜への接線と腹腔のパンクチャを避けるために皮膚表面に平行な針の方向を維持することが重要です。 線維脂肪の組織は、注射器内に蓄積する。一度十分な線維脂肪の組織の断片（フラグメントを豊富に含む血液の混合試料の最大1​​ mL）を取得され、完全に真空を解放し、針（3K図）を取り外します。 患者またはアシスタントが血液の溢出を防止するためのガーゼのパッドを持つプロシージャの領域でしっかり圧力を適用しています。 2。検体処理電子顕微鏡のためのグルタルアルデヒド溶液（図4B）で線維脂肪の組織の少なくとも5から6の断片を配置。 制度的なプロトコルに応じて、線維脂肪の組織の断片のいくつかの塗抹標本は、2つのスライド（図4A）との間で、それらを拡散させることによって調製することができる。 残りの材料は、シリンジ内の血栓（これが凝固時間に応じて、5〜7分かかる場合があります）（図4C）に許可されています。 凝固した線維脂肪の組織の材料が注射器とフリーフローティング（図4C2）の壁から外れているように注射器で10％ホルマリンを吸引除去する。注射器（図4C3）からプランジャーを取り外し、ノズルの端（図4C4）反対側のシリンジの開放端から10％ホルマリン容器にクロテッド線維脂肪の組織を移す。 適切な容器にラベルを付け、電子顕微鏡のためのグルタルアルデヒドを提出し、H＆Eセクションとコンゴレッドのためのホルマリンは、偏光顕微鏡下で評価するために染色。塗抹標本が準備されている場合、それらは個々の実験室のプロトコルに従って処理される可能性があります。 図1。前脂肪パッドのFNABのために麻酔になるエリア。 図2。ローカルエリアの麻酔。 図3。前脂肪パッドのFNABを実行。 図4。前脂肪パッドの処理は、アミロイド沈着を検出するための実験室に提出する吸引。 3。代表的な結果 図5。線維脂肪の組織フラグメントの小血管の壁にアミロイド。線維脂肪の組織はホルマリン加工、パラフィンコンゴレッドで染色し、埋め込 ​​み、および光学顕微鏡を偏光により調べた。小血管の壁にアミロイドは、アップルグリーン複屈折（白い矢印）を示しています。 図6。アミロイドーシスを欠いている組織は。青リンゴ色の複屈折は、アミロイドーシスのない別の患者の組織中に存在しない。コラーゲン線維の青の複屈折は（白矢印）、ほぼすべての標本で、通常は存在する。 図7。血管壁にアミロイドと一致して線維。血管壁にアミロイドが形成されたストレート、非分岐、ランダムに散らばって80〜10 nmの直径の線維の電子顕微鏡写真。