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Estudando o acúmulo de α-sinucleína induzida por fibril pré-formado em neurônios de dopamina de cérebro médio do camundongo embrionário primário
Journal JoVE
Neurosciences
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Journal JoVE Neurosciences
Studying Pre-formed Fibril Induced α-Synuclein Accumulation in Primary Embryonic Mouse Midbrain Dopamine Neurons

Estudando o acúmulo de α-sinucleína induzida por fibril pré-formado em neurônios de dopamina de cérebro médio do camundongo embrionário primário

DOI:
10.3791/61118-v

•

10:03 min

•

August 16, 2020

•

, , , ,
1Institute of Biotechnology, HiLIFE,University of Helsinki, 2Neuroscience Center, HiLIFE,University of Helsinki, 3Department of Brain Biochemistry, Maj Institute of Pharmacology,Polish Academy of Sciences

Chapitres

  • 00:04Introduction
  • 01:11Primary Embryonic Midbrain Culture Plate Preparation
  • 01:53Primary E13.5 Embryonic Midbrain Culture Setup
  • 04:32Seeding with Pre-Formed Fibrils (PFFs) and Semi-automated Immunofluorescence Imaging
  • 06:21High-Content Image Analysis
  • 07:42Results: Representative Midbrain Culture Characterization and Analysis
  • 09:13Conclusion

Summary

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Aqui, apresentamos um protocolo detalhado para estudar o acúmulo neuronal de α-sinucleína em neurônios primários de dopamina de camundongos. Os agregados fosforilados de α-sinucleína em neurônios são induzidos com fibrilas pré-formadas de α-sinucleína. Imagens automatizadas de células imunofluorescentamente rotuladas e análise de imagem imparcial tornam este protocolo robusto adequado para a triagem de rendimento médio a alto de drogas que inibem o acúmulo de α-sinucleína.

Tags

Keywords: Alpha-synucleinPreformed FibrilsPrimary Dopamine NeuronsParkinson’s DiseaseNeurodegenerative DiseaseProtein AccumulationCell CultureHigh-throughput ScreeningImage AnalysisNeuron FunctionMolecular Mechanisms

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