Journal
/
Génétique
/
In Vitro rettet utviklingen av en restriksjon endonuclease med strengere spesifisitet
Journal JoVE
Génétique
This content is Free Access.
Journal JoVE Génétique
In Vitro Directed Evolution of a Restriction Endonuclease with More Stringent Specificity

In Vitro rettet utviklingen av en restriksjon endonuclease med strengere spesifisitet

DOI:
10.3791/60807-v

•

09:16 min

•

March 25, 2020

•

,
1International Institute of Molecular and Cell Biology, Warsaw (IIMCB)

Chapitres

  • 00:05Introduction
  • 00:49Split-and-Mix Synthesis of Mutagenic Primers
  • 02:34Performing Compartmentalized In Vitro Transcription-translation Reaction
  • 05:07Continued Processing of Libraries and Selection
  • 07:20Results: Examples of Screening of NlaIV Variants for Sequence Specificity Alteration
  • 08:16Conclusion

Summary

Traduction automatique

Traduction automatique

Begrensning endonucleases med ny sekvens spesifisitet kan utvikles fra enzymer gjenkjenne en delvis degenerert sekvens. Her gir vi en detaljert protokoll som vi med hell brukte til å endre sekvensspesifisiteten til NlaIV-enzymet. Viktige ingredienser i protokollen er in vitro compartmentalization av transkripsjon / oversettelse reaksjon og valg av varianter med nye sekvens spesifisiteter.

Tags

In Vitro Directed EvolutionRestriction EndonucleaseSequence SpecificityIn Vitro CompartmentalizationDirected EvolutionSubsaturation MutagenesisOligonucleotide SynthesisOil Surfactant MixtureLibrary Preparation

Article

Embed

AJOUTER À LA PLAYLIST

Usage Statistics

Vidéos Connexes

Design og bruk av en lav pris, Automated Morbidostat for Adaptive Evolution of Bakterier Under Antibiotika Drug Selection

Prosedyre for Adaptive Laboratory Utviklingen av mikroorganismer ved hjelp av en kjemostat

Genome Redigering og Regissert Differensiering av hPSCs for Henting Lineage Determinanter i Human bukspyttkjertelen Development

Kvantifisering av informasjonen kodet av Gene Expression nivåer under levetid modulering Under bredt kosttilskudd restriksjon i C. elegans

Generering av en gen-forstyrret Streptococcus mutans belastning uten Gene kloning

Testing Multicopy plasmider rolle i utviklingen av antibiotikaresistens

Genomet hele overvåking av transkripsjon feil i eukaryote organismer

Produsere Gene slettingene i Escherichia coli av P1 signaltransduksjon med Excisable antibiotikaresistens kassetter

Bruke i Vitro og i celle form å undersøke små molekyl indusert Pre-mRNA strukturelle endringer

Bruke Sniper-Cas9 å minimere Off-målet effekter av CRISPR-Cas9 uten tap av på målet aktivitet Via regissert evolusjon

Read Article