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Single-step Purification of Macromolecular Complexes Using RNA Attached to Biotin and a Photo-cleavable Linker

Purificação de etapa única de complexos macromoleculares usando RNA ligado à biotina e um foto-cleavable vinculador

DOI:
10.3791/58697-v

•

08:12 min

•

January 03, 2019

•

, ,
1Integrative Program for Biological and Genome Sciences,University of North Carolina at Chapel Hill, 2Department of Biochemistry and Biophysics,University of North Carolina at Chapel Hill

Chapitres

  • 00:04Titre
  • 00:51Substrate Preparation
  • 01:28Complex Assembly
  • 02:14Immobilization of the RNA/protein Complexes on Streptavidin Beads
  • 04:00UV-Elution
  • 05:08Sample Analysis by Silver Staining Followed by Mass Spectrometry
  • 05:59Results: Analysis of UV-eluted Complexes
  • 07:36Conclusion

Summary

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Complexos de RNA/proteínas purificados usando estratégia botin-streptavidin são eluídos a solução sob condições de desnaturação de forma inadequada para mais de purificação e análise funcional. Aqui, descrevemos uma modificação desta estratégia que utiliza um foto-cleavable vinculador em RNA e um passo de UV-eluição suave, produzindo complexos de RNA/proteína nativos e totalmente funcionais.

Tags

RNA Protein ComplexesSingle-step PurificationBiotinPhoto-cleavable LinkerMass SpectrometryT7 Generated RNAAdaptor OligonucleotideMouse Nuclear ExtractEDTAStreptavidin Agarose BeadsBinding BufferCentrifugationTube Rotation

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