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Seule étape Purification des Complexes macromoléculaires utilisant l’ARN attaché à la biotine et un éditeur de liens Photo-clivables
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Single-step Purification of Macromolecular Complexes Using RNA Attached to Biotin and a Photo-cleavable Linker
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Seule étape Purification des Complexes macromoléculaires utilisant l’ARN attaché à la biotine et un éditeur de liens Photo-clivables

DOI:
10.3791/58697-v

•

08:12 min

•

January 03, 2019

•

, ,
1Integrative Program for Biological and Genome Sciences,University of North Carolina at Chapel Hill, 2Department of Biochemistry and Biophysics,University of North Carolina at Chapel Hill

Chapitres

  • 00:04Titre
  • 00:51Substrate Preparation
  • 01:28Complex Assembly
  • 02:14Immobilization of the RNA/protein Complexes on Streptavidin Beads
  • 04:00UV-Elution
  • 05:08Sample Analysis by Silver Staining Followed by Mass Spectrometry
  • 05:59Results: Analysis of UV-eluted Complexes
  • 07:36Conclusion

Summary

Traduction automatique

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Les complexes ARN/protéines purifiées à l’aide de la stratégie de streptavidine-botin sont éluées à solution dans des conditions dénaturation sous une forme impropre pour davantage de purification et d’analyse fonctionnelle. Nous décrivons ici une modification de cette stratégie qui utilise un linker photo-clivables en ARN et une étape d’élution UV douce, ce qui donne des complexes ARN/protéines natives et pleinement fonctionnels.

Tags

RNA Protein ComplexesSingle-step PurificationBiotinPhoto-cleavable LinkerMass SpectrometryT7 Generated RNAAdaptor OligonucleotideMouse Nuclear ExtractEDTAStreptavidin Agarose BeadsBinding BufferCentrifugationTube Rotation

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