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艰难梭菌(p) pppp 合成酶的纯化及体外活性测定
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Journal JoVE Immunologie et infection
A Purification and In Vitro Activity Assay for a (p)ppGpp Synthetase from Clostridium difficile
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艰难梭菌(p) pppp 合成酶的纯化及体外活性测定

DOI:
10.3791/58547-v

•

09:53 min

•

November 03, 2018

•

, ,
1Department of Chemistry and Biochemistry,Old Dominion University

Chapitres

  • 00:04Titre
  • 00:44Protein Purification by Nickel Affinity Chromatography
  • 03:30Protein Activity Assay by Thin Layer Chromatography
  • 07:30Results: Thin Layer Chromatography Reveals that C. difficile RSH is an Active ppGpp Synthetase
  • 09:01Conclusion

Summary

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本文介绍了一种纯化带组氨酸标记的热释蛋白酶的方法, 并利用放射性标记底物和产物的薄层色谱法测定了体外的酶活性。酶活性测定广泛适用于任何激酶、核苷酸循环酶或磷转移反应, 其机理包括三磷酸核苷酸水解。

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Protein PurificationIn Vitro Activity Assay(p)ppGpp SynthetaseClostridium DifficilePhosphotransfer EnzymesEnzyme Substrate SpecificityReaction KineticsTLCSDS-PAGECoomassie Blue Staining

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