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Un protocollo per la produzione di vettori lentivirali integrasi-carenti per CRISPR/Cas9-mediata Knockout del Gene nelle cellule in divisione
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A Protocol for the Production of Integrase-deficient Lentiviral Vectors for CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockout in Dividing Cells
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Un protocollo per la produzione di vettori lentivirali integrasi-carenti per CRISPR/Cas9-mediata Knockout del Gene nelle cellule in divisione

DOI:
10.3791/56915-v

•

10:42 min

•

December 12, 2017

•

,
1Duke Viral Vector Core, Department of Neurobiology,Duke University School of Medicine

Chapitres

  • 00:05Titre
  • 00:52Transfecting of HEK-293T Cells Using Calcium Phosphate
  • 02:19Harvesting Virus
  • 02:50Concentration of Viral Particles by Ultracentrifugation
  • 05:11Esimating of Viral Titers Using p24-enzyme-linked Immunosorbent Assay
  • 07:31Counting GFP-positive Cells
  • 08:25Results: Production and Validation of the Knockout-efficiency of Integrase-deficient Lentiviral-CRSPER/Cas9 Vector
  • 09:57Conclusion

Summary

Traduction automatique

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Descriviamo la strategia di produzione di vettori lentivirali integrasi-carente (IDLVs) come veicoli per la consegna di CRISPR/Cas9 alle cellule. Con una capacità di mediare rapido e robusto gene modifica nelle celle, IDLVs presentare una più sicura e piattaforma altrettanto efficace vettore per la consegna del gene rispetto ai vettori integrasi-competente.

Tags

Integrase-deficient Lentiviral VectorsCRISPR/Cas9Gene EditingHEK-293T CellsTransfectionSucrose GradientUltracentrifugation

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