This content is Free Access.
Chapitres
- 00:05Titre
- 00:48Digestion of DNA with MNase and Separation of DNA Fragments by PAGE
- 03:05Isolation of DNA Fragments from PAGE Gels and Linker Generation
- 04:26End Repair of Gel-purified Fragments and Linker Ligation
- 05:32Size Selection and Assembly of Vector-insert Construct
- 06:18Electroporation of TG1 Electrocompetent E. coli Cells
- 08:38Results: a gRNA Library can be Generated from and Target DNA
- 09:56Conclusion
Metoder for å generere storskala gRNA biblioteker bør være enkel, effektiv og kostnadseffektiv. Vi beskriver en protokoll for produksjon av gRNA biblioteker basert på enzymatisk fordøyelsen av målet DNA. Denne metoden CORALINA (omfattende gRNA biblioteket generasjon gjennom kontrollert nuclease aktivitet) presenterer et alternativ til kostbar egendefinerte oligonucleotide syntese.
